Interferoon alfa 2b süstid. Kõik ravimite kohta. Interferooni analoogide kasutamine meditsiinis

Imemine

Interferoon alfa-2b subkutaansel või intramuskulaarsel manustamisel on selle biosaadavus vahemikus 80% kuni 100%. Pärast alfa-2b-interferooni kasutuselevõttu on Tmax vereplasmas 4–12 tundi, T1 / 2–2–6 tundi. 16–24 tundi pärast manustamist ei tuvastata rekombinantset interferooni vereseerumis.

Ainevahetus

Metabolism toimub maksas.

Alfa-interferoonid on võimelised häirima oksüdatiivseid ainevahetusprotsesse, vähendades tsütokroom P450 süsteemi mikrosomaalsete maksaensüümide aktiivsust.

Taganemine

See eritub peamiselt neerude kaudu glomerulaarfiltratsiooni teel.

Üleannustamine

Altevir® üleannustamise kohta andmeid ei ole.

Ladustamistingimused

Ravimit tuleks hoida vastavalt SP 3.3.2-1248-03 lastele kättesaamatus kohas temperatuuril 2–8 ° C; mitte külmuda.

Koostoimed teiste ravimitega

Alteviri ja teiste ravimite koostoimet ei ole täielikult uuritud. Alteviri® tuleb kasutada ettevaatusega samaaegselt uinutite ja rahustite, narkootiliste analgeetikumide ja ravimitega, millel võib olla müelodepressant.

Alteviri ja teofülliini samaaegsel määramisel tuleb jälgida nende kontsentratsiooni vereseerumis ja vajadusel muuta annustamisskeemi.

Alteviri kasutamisel koos kemoterapeutiliste ravimitega (tsütarabiin, tsüklofosfamiid, doksorubitsiin, teniposiid) suureneb toksiliste mõjude oht.

Kõrvalmõju

Üldised reaktsioonid: väga sageli - palavik, nõrkus (need on annusest sõltuvad ja pöörduvad reaktsioonid, kaovad 72 tunni jooksul pärast ravi katkemist või selle lõpetamist), külmavärinad; harvem halb enesetunne.

Kesknärvisüsteemi küljelt: väga sageli - peavalu; harvem - asteenia, unisus, pearinglus, ärrituvus, unetus, depressioon, enesetapumõtted ja -katsed; harva - närvilisus, ärevus.

Lihas-skeleti süsteemist: väga sageli - müalgia; harvemini - artralgia.

Seedesüsteemist: väga sageli - söögiisu vähenemine, iiveldus; harvem - oksendamine, kõhulahtisus, suukuivus, maitse muutus; harva - kõhuvalu, düspepsia; võib-olla maksaensüümide aktiivsuse pöörduv suurenemine.

Kardiovaskulaarsüsteemi küljelt: sageli - vererõhu alandamine; harva - tahhükardia.

Dermatoloogilised reaktsioonid: harvem - alopeetsia, suurenenud higistamine; harva - nahalööve, nahasügelus.

Hematopoeetilise süsteemi osa: võimalik on pöörduv leukopeenia, granulotsütopeenia, hemoglobiini taseme langus, trombotsütopeenia.

Muud: harva - kaalulangus, autoimmuunne türeoidiit.

Koostis

inimese rekombinantne alfa-2b-interferoon 3 miljonit RÜ

Abiained: naatriumatsetaat, naatriumkloriid, tetraäädikhappe etüleendiamiini dinaatriumsool, tween-80, dekstraan 40, vesi d / i.

Annustamine ja manustamine

Rakendage s / c, i / m ja i / v. Ravi peab alustama arst. Lisaks võib patsient arsti loal süstida endale ise säilitusannuse (juhtudel, kui ravimile on ette nähtud s / c või i / m).

Krooniline B-hepatiit: Altevir® manustatakse subkutaanselt või intramuskulaarselt annuses 5-10 miljonit RÜ 3 korda nädalas 16-24 nädala jooksul. Ravi lõpetatakse pärast 3-4-kuulist kasutamist positiivse dünaamika puudumisel (vastavalt B-hepatiidi viiruse DNA uuringule).

Krooniline C-hepatiit: Altevir® manustatakse subkutaanselt või intramuskulaarselt annuses 3 miljonit RÜ 3 korda nädalas 24-48 nädala jooksul. Korduva haiguse kuluga patsientidel ja patsientidel, kes ei ole varem saanud ravi alfa-2b-interferooniga, suureneb ribaviriiniga kombineeritud ravi korral ravi efektiivsus. Kombineeritud ravi kestus on vähemalt 24 nädalat. Alteviirravi tuleb läbi viia 48 nädala jooksul kroonilise C-hepatiidi ja kõrge viiruskoormusega 1. genotüübiga patsientidel, kellel esimese 24 ravinädala lõpuks ei leita seerumis C-hepatiidi viiruse RNA-d.

Kõri papillomatoos: Altevir® manustatakse subkutaanselt annuses 3 miljonit RÜ / m2 3 korda nädalas. Ravi algab pärast kasvajakoe kirurgilist (või laser) eemaldamist. Annus valitakse, võttes arvesse ravimi talutavust. Positiivse vastuse saavutamiseks võib olla vajalik 6-kuuline ravi.

Karvane raku leukeemia: Alteviri soovitatav annus SC manustamiseks patsientidele pärast splenektoomiat või ilma selleta on 2 miljonit RÜ / m2 3 korda nädalas. Enamikul juhtudel toimub ühe või mitme hematoloogilise parameetri normaliseerumine pärast 1-2-kuulist ravi, on võimalik ravi kestust suurendada 6 kuuni. Sellest annustamisskeemist tuleb pidevalt kinni pidada, välja arvatud juhul, kui haigus kiiresti progresseerub või ilmnevad tõsise ravimitalumatuse sümptomid.

Krooniline müeloidne leukeemia: Alteviri soovitatav annus monoteraapiana on 4–5 miljonit RÜ / m2 päevas n / päevas. Leukotsüütide arvu säilitamiseks võib olla vajalik kasutada annust 0,5-10 miljonit RÜ / m2. Kui ravi võimaldab teil kontrollida leukotsüütide arvu, siis hematoloogilise remissiooni säilitamiseks tuleks ravimit kasutada maksimaalses talutavas annuses (4-10 miljonit RÜ / m2 päevas). Ravi tuleb lõpetada 8–12 nädala pärast, kui ravi ei põhjustanud osalist hematoloogilist remissiooni ega leukotsüütide arvu kliiniliselt olulist vähenemist.

Mitte-Hodgkini lümfoom: Alteviri® kasutatakse adjuvantravina kombinatsioonis standardsete keemiaravi režiimidega. Ravimit manustatakse s / c annuses 5 miljonit RÜ / m2 3 korda nädalas 2-3 kuu jooksul. Annust tuleb kohandada sõltuvalt ravimi talutavusest.

Melanoom: Alteviri® kasutatakse abiainena, kui pärast kasvaja eemaldamist on täiskasvanutel suur kordumise oht. Altevir® manustatakse intravenoosselt annuses 15 miljonit RÜ / m2 5 korda nädalas 4 nädala jooksul, seejärel s / c annuses 10 miljonit RÜ / m2 3 korda nädalas 48 nädala jooksul. Annust tuleb kohandada sõltuvalt ravimi talutavusest.

Hulgimüeloom: stabiilse remissiooni saavutamiseks määratakse Altevir® annusega 3 miljonit RÜ / m2 3 korda nädalas n / a.

AIDS-iga seotud Kaposi sarkoom: optimaalset annust pole kindlaks tehtud. Ravimit võib kasutada annustes 10–12 miljonit RÜ / m2 / päevas s / c või i / m. Haiguse stabiliseerumise või ravivastuse korral jätkatakse ravi kuni kasvaja taandarenemiseni või on vajalik ravimi ärajätmine.

Neeruvähk: optimaalset annust ja ajakava pole kindlaks tehtud. Ravimit soovitatakse kasutada subkutaanselt annustes 3 kuni 10 miljonit RÜ / m2 3 korda nädalas.

Intravenoosseks manustamiseks mõeldud lahuse valmistamine

Kogutakse vajaliku annuse valmistamiseks vajalik Alteviri lahuse maht, lisatakse 100 ml steriilsesse 0,9% naatriumkloriidi lahusesse ja manustatakse 20 minuti jooksul.

Tootekirjeldus

Süstelahus on läbipaistev, värvitu.

Ettevaatlikult (ettevaatusabinõud)

Kasutamine maksafunktsiooni kahjustuse korral

Neerufunktsiooni kahjustuse taotlus

Ravim on vastunäidustatud raske neeru- ja / või maksapuudulikkuse korral (sealhulgas need, mis on põhjustatud metastaaside olemasolust).

erijuhised

Enne kroonilise B- ja C-viirushepatiidi ravi Alteviriga on soovitatav teha maksa biopsia, et hinnata maksakahjustuse määra (aktiivse põletikulise protsessi ja / või fibroosi nähud). Kroonilise C-hepatiidi ravi efektiivsus suureneb koos raviga Alteviri ja ribaviriiniga. Alteviri kasutamine ei ole efektiivne dekompenseeritud maksatsirroosi ega maksakooma tekkeks.

Alteviriga ravi ajal tekkivate kõrvaltoimete ilmnemisel tuleb ravimi annust vähendada 50% või ravim ajutiselt tühistada, kuni need kaovad. Kui kõrvaltoimed püsivad või ilmnevad uuesti pärast annuse vähendamist või kui täheldatakse haiguse progresseerumist, tuleb ravi Altevir'iga katkestada.

Kui trombotsüütide arv on alla 50x109 / L või granulotsüütide arv on alla 0,75x109 / L, on soovitatav vähendada nädala jooksul Alteviri annust 2 korda, kontrollides vereproovi. Kui need muutused püsivad, tuleb ravim tühistada.

Kui trombotsüütide arv langeb alla 25x109 / l või granulotsüütide arv on alla 0,5x109 / l, on soovitatav Alteviri kasutamine 1 nädala pärast lõpetada vereanalüüsiga.

Interferoon alfa-2b preparaate saavatel patsientidel on vereseerumis võimalik tuvastada antikehi, mis neutraliseerivad selle viirusevastase aktiivsuse. Peaaegu kõigil juhtudel on antikehade tiitrid madalad, nende välimus ei vähenda ravi efektiivsust ega muude autoimmuunsete häirete esinemist.

Kasutamine raseduse ja imetamise ajal

Ravim on vastunäidustatud raseduse ja imetamise ajal (imetamine).

Vabastusvorm

Süstelahus on läbipaistev, värvitu.
1 ml
inimese rekombinantne alfa-2b-interferoon 3 miljonit RÜ
Abiained: naatriumatsetaat, naatriumkloriid, tetraäädikhappe etüleendiamiini dinaatriumsool, tween-80, dekstraan 40, vesi

Kehtivusaeg alates valmistamiskuupäevast

18 kuud

Näidustused

Täiskasvanute kompleksravi osana:

Kroonilise B-viirushepatiidi korral ilma maksatsirroosi tunnusteta;

Kroonilise C-viirushepatiidi korral maksapuudulikkuse sümptomite puudumisel (monoteraapia või kombinatsioonravi ribaviriiniga);

Koos kõri papillomatoosiga;

Suguelundite tüügastega;

Karvrakulise leukeemia, kroonilise müeloidse leukeemia, mitte-Hodgkini lümfoomi, melanoomi, hulgimüeloomi, Kaposi sarkoomiga AIDSi olemasolul, progresseeruva neeruvähiga.

Vastunäidustused

Raske südame-veresoonkonna haiguse anamneesis (kontrollimatu krooniline südamepuudulikkus, hiljutine müokardiinfarkt, rasked südame rütmihäired);

Raske neeru- ja / või maksakahjustus (sealhulgas need, mis on põhjustatud metastaaside olemasolust);

Epilepsia, samuti kesknärvisüsteemi rasked talitlushäired, mida väljendavad eriti depressioon, enesetapumõtted ja -katsed (sealhulgas anamnees);

Krooniline hepatiit koos dekompenseeritud maksatsirroosiga ja patsientidel, kes saavad või on hiljuti ravi saanud immunosupressantidega (välja arvatud täielik lühiajaline GCS-ravi kuur);

Autoimmuunne hepatiit või muu autoimmuunhaigus;

Ravi immunosupressantidega pärast siirdamist;

Kilpnäärme haigus, mida tavapäraste terapeutiliste meetoditega ei saa kontrollida;

Dekompenseeritud kopsuhaigused (sealhulgas KOK);

Dekompenseeritud suhkruhaigus;

Hüperkoagulatsioon (sealhulgas tromboflebiit, kopsuarteri trombemboolia);

Raske müelodepressioon;

Rasedus;

Imetamise (imetamise) periood;

Ülitundlikkus ravimite komponentide suhtes.

farmakoloogiline toime

Interferoon. Altevir® omab viirusevastast, immunomoduleerivat, antiproliferatiivset ja kasvajavastast toimet.

Interferoon alfa-2b, mis toimib raku pinnal spetsiifiliste retseptoritega, käivitab rakus keeruka muutuste ahela, sealhulgas paljude spetsiifiliste tsütokiinide ja ensüümide sünteesi indutseerimise, häirib viiruse RNA ja viirusevalkude sünteesi rakus. Nende muutuste tulemuseks on mittespetsiifiline viirusevastane ja antiproliferatiivne toime, mis on seotud viiruse replikatsiooni ennetamisega rakus, raku proliferatsiooni pärssimise ja interferooni immunomoduleeriva toimega. Interferoon alfa-2b stimuleerib antigeenide esitlemist immunokompetentsetele rakkudele, tal on võime stimuleerida makrofaagide fagotsüütilist aktiivsust, samuti T-rakkude ja "looduslike tapjarakkude" tsütotoksilist aktiivsust, mis on seotud viirusevastase immuunsusega.

Takistab rakkude, eriti tuumorirakkude vohamist. Sellel on mõne onkogeeni sünteesi masendav mõju, mis pärsib tuumori kasvu.

Interferoonipreparaatide koostis sõltub nende vabanemisvormist.

Vabastusvorm

Interferoonipreparaatidel on järgmised vabastamisvormid:

• lüofiliseeritud pulber silma- ja ninatilkade valmistamiseks, süstelahus;
• süstelahus;
• silmatilgad;
• silmafilmid;
• ninatilgad ja pihusti;
• salv;
• dermatoloogiline geel;
• liposoomid;
• pihustuskann;
• suukaudne lahus;
• rektaalsed ravimküünlad;
• vaginaalsed ravimküünlad;
• implantaadid;
• mikroklüsterid;
• tabletid (tablettidena müüakse interferooni kaubamärgi Entalferon all).

farmakoloogiline toime

IFN-ravimid kuuluvad viirusevastase ja immunomoduleeriva toimega ravimite rühma.

Kõigil IFN-del on viirusevastane ja kasvajavastane toime. Sama oluline on nende võime stimuleerida tegevust. makrofaagid - rakud, millel on initsieerimisel oluline roll.

IFN-id suurendavad keha vastupidavust läbitungimisele viirused ja ka blokeerida reprodutseerimist viirused kui nad sisenevad lahtrisse. Viimane on tingitud IFN-i võimest alla suruda viiruse maatriksi (informatiivse) RNA translatsioon .

Kuid IFN viirusevastane toime ei ole suunatud kindlatele viirused , see tähendab, et IFN-e ei iseloomusta viirusspetsiifilisus. See seletab nende mitmekülgsust ja laia viirusevastase aktiivsuse ulatust.

Interferoon - mis see on?

Interferoonid on sarnaste omaduste klass glükoproteiinid , mida produtseerivad selgroogsed rakud vastusena nii viirusliku kui ka mitteviirusliku olemusega mitmesuguste indutseerijate mõjule.

Vikipeedia andmetel peab bioloogiliselt aktiivne aine interferooniks kvalifitseeruma, kuid sellel peab olema valgu iseloom, sellel peab olema selgelt väljendunud viirusevastane toime seoses erinevate viirused , vähemalt homoloogsetes (sarnastes) rakkudes, "mida vahendavad rakulised metaboolsed protsessid, sealhulgas RNA ja valgu süntees".

WHO ja interferoonikomitee kavandatud IFN-de klassifikatsioon põhineb erinevustel nende antigeensetes, füüsikalistes, keemilistes ja bioloogilistes omadustes. Lisaks võtab see arvesse nende liike ja rakulist päritolu.

Antigeensuse (antigeense spetsiifilisuse) järgi jaguneb IFN tavaliselt happekindlaks ja happelabiilseks. Alfa- ja beeta-interferoonid (neid nimetatakse ka I tüüpi IFN-deks) on happekiired. Gamma-interferoon (γ-IFN) on happelabiilne.

α-IFN-d tekitavad perifeerse vere leukotsüüdid (B- ja T-tüüpi leukotsüüdid), seetõttu nimetati seda varem leukotsüütide interferoon ... Praegu on seda vähemalt 14 sorti.

β-IFN-i tootmine fibroblastid nii nimetatakse ka fibroblastiline .

Endine nimetus γ-IFN - immuuninterferoon , see on toodetud stimuleeritud t-tüüpi lümfotsüüdid , NK rakud (tavalised (looduslikud) tapjad; ingliskeelsest sõnast "natural killer") ja (oletatavasti) makrofaagid .

IFN peamised omadused ja toimemehhanism

Ilma eranditeta iseloomustab kõiki IFN-e polüfunktsionaalne toime sihtrakkude vastu. Nende kõige tavalisem omadus on võime neis esile kutsuda viirusevastane seisund .

Interferooni kasutatakse mitmesuguste ravimite terapeutilise ja profülaktilise ainena viirusnakkused ... IFN-i preparaatide eripäraks on see, et korduvate süstidega nõrgendatakse nende toimet.

IFN toimemehhanism on seotud selle võimega pärssida viirusnakkused ... Interferoonravimitega ravi tagajärjel patsiendi kehas nakkuse fookus - teatud tüüpi tõke on moodustatud vastupidavast viirus nakatumata rakud, mis hoiab ära nakkuse edasise leviku.

Suheldes endiselt puutumatute (puutumatute) rakkudega, häirib see reproduktiivtsüklit viirused aktiveerides teatud rakuensüümid ( proteiinkinaasid ).

Interferoonide kõige olulisemateks funktsioonideks peetakse supressioonivõimet vereloome ; moduleerida keha immuunvastust ja põletikulist vastust; reguleerida rakkude vohamise ja diferentseerumise protsesse; pärsivad kasvu ja pärsivad paljunemist viirusrakud ; stimuleerida pinna ekspressiooni antigeenid ; individuaalsete funktsioonide pärssimine b- ja T-tüüpi leukotsüüdid , stimuleerida tegevust NK rakud jne..

IFN kasutamine biotehnoloogias

Sünteesimeetodite arendamine ja ülitõhus puhastamine leukotsüüdid ja rekombinantsed interferoonid ravimite tootmiseks piisavates kogustes, võimaldas avastada võimaluse kasutada IFN preparaate patsientide diagnoosimiseks, kellel on viirushepatiit .

Rekombinantsete IFN-ide eripäraks on see, et neid saadakse väljaspool inimkeha.

Näiteks, rekombinantne beeta-1a-interferoon (IFN β-1a) saadud imetajarakkudest (eriti Hiina hamstri munasarjade rakkudest) ja oma omadustelt sarnased beeta-1b-interferoon (IFN β-1b) toodetud kuulumisega enterobakterite perekonda colibacillus (Escherichia coli).

Interferooni indutseerivad ravimid - mis need on?

IFN indutseerijad on ravimid, mis ise ei sisalda interferooni, kuid stimuleerivad samal ajal selle tootmist.

Farmakodünaamika ja farmakokineetika

Α-IFN peamine bioloogiline toime on viirusvalkude sünteesi pärssimine ... Raku viirusevastane seisund areneb mõne tunni jooksul pärast ravimi kasutamist või IFN-i tootmise indutseerimist kehas.

Kuid IFN ei mõjuta varases staadiumis. replikatsioonitsükkel see tähendab adsorptsiooni etapis tungimist viirus rakku (läbitungimine) ja sisemise komponendi vabastamine viirus tema lahti riietumise protsessis.

Viirusetõrje α-IFN ilmub isegi rakkude nakatumise korral nakkav RNA ... IFN ei tungi rakku, vaid interakteerub ainult spetsiifiliste retseptoritega rakumembraanid (gangliosiidid või muud samalaadsed struktuurid oligosuhkur ).

IFN alfa toimemehhanism sarnaneb indiviidi toimega glükopeptiidhormoonid ... See stimuleerib aktiivsust geenid millest mõned on seotud otsemooduliga toodete moodustumise kodeerimisega viirusevastane toime .

β-interferoonid ka valdama viirusevastane toime , mis on seotud mitme toimemehhanismiga. Beeta-interferoon aktiveerib N0-süntetaasi, mis omakorda aitab kaasa lämmastikoksiidi kontsentratsiooni suurenemisele raku sees. Viimane mängib paljunemise pärssimisel võtmerolli. viirused .

β-IFN aktiveerib sekundaarsed efektorfunktsioonid loomulik tapjasisse , b-tüüpi lümfotsüüdid , vere monotsüüdid , koe makrofaagid (mononukleaarsed fagotsüüdid) ja neutrofiil mida iseloomustab antikehadest sõltuv ja antikehadest sõltumatu tsütotoksilisus.

Lisaks blokeerib β-IFN sisemise komponendi vabanemise viirus ja häirib metüülimisprotsesse Viiruse RNA .

γ-IFN osaleb immuunvastuse reguleerimises ja reguleerib raskusastet põletikulised reaktsioonid. Vaatamata sellele, et ta on iseseisev viirusetõrje ja kasvajavastane toime , gamma-interferoon väga nõrk. Lisaks suurendab see märkimisväärselt α- ja β-IFN aktiivsust.

Pärast parenteraalset manustamist täheldatakse IFN c maksimaalset kontsentratsiooni 3 ... 12 tunni pärast. Biosaadavuse indikaator on 100% (nii pärast naha alla manustamist kui ka pärast lihasesse sisestamist).

T½ poolväärtusaeg on 2 kuni 7 tundi. Järelkontrolli plasmakontsentratsiooni ei tuvastata 16–24 tunni pärast.

Näidustused

IFN on ette nähtud raviks viirushaigused mõjutavad hingamisteed .

Lisaks on kroonilise vormiga patsientidele ette nähtud interferoonipreparaadid. hepatiit ja delta .

Raviks viirushaigused ja eriti kasutatakse peamiselt IFN-α (mõlemad on IFN-alfa 2b ja IFN-alfa 2a). Ravi kuldstandard hepatiit C tavaks peetakse pegüleeritud interferoone alfa-2b ja alfa-2a. Võrdluseks - tavapärased interferoonid on vähem efektiivsed.

IFN lambda-3 kodeerimise eest vastutavas geenis IL28B täheldatud geneetiline polümorfism põhjustab olulisi erinevusi ravitoimes.

1. genotüübiga patsiendid hepatiit C täpsustatud geeni tavaliste alleelidega, on tõenäolisem, et võrreldes teiste patsientidega saavutaksid ravi pikemad ja selgemad tulemused.

Samuti määratakse IFN sageli patsientidele, kellel on onkoloogilised haigused : pahaloomuline , pankrease endokriinsed kasvajad , mitte-Hodgkini lümfoom , kartsinoidsed kasvajad ; kaposi sarkoom tõttu; karvaste rakkude leukeemia , hulgimüeloom , neeruvähk jne..

Vastunäidustused

Interferooni ei määrata patsientidele, kellel on selle suhtes ülitundlikkus, samuti lastele, kes põevad seda rasked psüühikahäired ja närvisüsteemi häired millega kaasnevad tõsised ja pikaleveninud mõtted enesetappude ja enesetapukatsete kohta.

Koos viirusevastane ravim ribaviriin IFN on vastunäidustatud tõsise talitlushäirega patsientidele neeru (tingimused, milles CC on alla 50 ml / min).

Interferoonipreparaadid on vastunäidustatud (juhtudel, kui sobiv ravi ei anna loodetud kliinilist efekti).

Kõrvalmõjud

Interferoon kuulub ravimite kategooriasse, mis võib põhjustada suurt hulka kõrvaltoimeid erinevatest süsteemidest ja elunditest. Enamasti on need interferooni sisse / sisse, s / c või / m sisseviimise tagajärjed, kuid need võivad provotseerida ka teisi ravimi farmatseutilisi vorme.

IFN-i manustamisel esinevad kõige tavalisemad kõrvaltoimed:

• isutus;
• iiveldus;
• külmavärinad;
• värisemine kehas.

Mõnevõrra vähem levinud on oksendamine, suurenenud suu kuivus, juuste väljalangemine (). asteenia ; mittespetsiifilised sümptomid, mis sarnanevad gripi sümptomid ; seljavalu, depressiivsed seisundid , luu- ja lihaskonna valu , enesetapumõtted ja enesetapukatsed, üldine halb enesetunne, halvenenud maitse ja keskendumisvõime, suurenenud ärrituvus, unehäired (sageli), arteriaalne hüpotensioon segadus.

Harva esinevate kõrvaltoimete hulka kuuluvad: valu paremal ülakõhus, lööbed kehal (erütematoossed ja makulopapulaarsed), suurenenud närvilisus, valulikkus ja tugev põletik ravimi süstekohas, sekundaarne viirusnakkus (sealhulgas nakkus herpes simplex viirus ), naha suurenenud kuivus, , valu silmades , konjunktiviit , nägemise hägustumine, funktsiooni halvenemine piimanäärmed ärevus, meeleolu labiilsus; psühhootilised häired , sealhulgas suurenenud agressioon jne; hüpertermia , düspeptilised sümptomid hingamisteede häired, kehakaalu langus, lahtised väljaheited, hüper- või hüpotüreoidism , kuulmiskahjustus (kuni selle täieliku kadumiseni), infiltraatide moodustumine kopsudes, söögiisu suurenemine, igemete veritsemine, jäsemed, hingeldus neerufunktsiooni kahjustus ja neerupuudulikkuse areng , perifeerne isheemia , hüperurikeemia , neuropaatiad jne..

IFN-ravi võib esile kutsuda reproduktiivfunktsiooni häired ... Primaatidel tehtud uuringud on näidanud, et interferoon häirib menstruaaltsüklit naistel ... Lisaks oli naistel, kes said ravi IFN-α ravimitega, c

Sel põhjusel peaksid interferooni määramise korral kasutama fertiilses eas naised barjäär kontratseptiivid ... Reproduktiivses eas meestel soovitatakse teatada ka võimalikest kõrvaltoimetest.

Harvadel juhtudel võib interferoonraviga kaasneda oftalmoloogilised häired, mida väljendatakse kujul võrkkesta hemorraagia , retinopaatiad (sh kollatähni tursed ), fookuskaugus võrkkestas, vähenenud nägemisteravus ja / või nägemisväljade piiramine, nägemisnärvi tursed , silma (teise kraniaalse) närvi neuriit , arteriaalne obstruktsioon või võrkkesta veenid .

Mõnikord võivad interferooni võtmise ajal need välja areneda hüperglükeemia , nefrootilise sündroomi sümptomid ,. Patsientidel, kellel on suhkurtõbi haiguse kliiniline pilt võib halveneda.

Esinemise tõenäosus pole välistatud, tserebrovaskulaarne hemorraagia , multiformne erüteem , kudede nekroos süstekohas südame- ja tserebrovaskulaarne isheemia , hüpertriglütserideemia , sarkoidoos (või selle süvenemine), lyelli sündroomid ja Stevens-Johnson .

Interferooni kasutamine monoteraapiana või koos Ribaviriin üksikjuhtudel võib see provotseerida aplastiline aneemia (AA) või isegi PAKKM ( punase luuüdi täielik aplaasia ).

Samuti registreeriti juhtumeid, kus interferoonravimitega ravimise taustal tekkis patsiendil mitmesuguseid haigusi autoimmuunne ja immuunvahendatud häired (kaasa arvatud werlhofi tõbi ja moshkovitzi haigus ).

Interferoon, kasutusjuhised (viis ja annus)

Alfa-, beeta- ja gamma-interferoonide kasutamise juhised näitavad, et enne patsiendile ravimi väljakirjutamist on soovitatav kindlaks teha, kui tundlikud ta on selle suhtes mis põhjustas haiguse.

Inimese leukotsüütide interferooni manustamisviis määratakse sõltuvalt patsiendile tehtud diagnoosist. Enamikul juhtudel on see ette nähtud nahaaluste süstide vormis, kuid mõnel juhul võib ravimit süstida lihasesse või veeni.

Ravi annus, säilitusannus ja ravi kestus määratakse sõltuvalt kliinilisest olukorrast ja patsiendi reageerimisest ettenähtud ravile.

"Beebi" all mõeldakse interferooni ravimina suposiitide, tilkade ja salvide kujul.

Interferooni kasutamise juhised lastele soovitavad seda ravimit kasutada terapeutilise ja profülaktilise vahendina. Imikutele ja vanematele lastele mõeldud annuse valib raviarst.

Ennetuslikel eesmärkidel kasutatakse INF lahuse kujul, mille valmistamiseks kasutatakse toatemperatuuril destilleeritud või keedetud vett. Valmis lahus on punase värvusega ja opalestseeruv. Seda tuleks hoida külmas mitte rohkem kui 24-48 tundi. Ravimit tilgutatakse laste ja täiskasvanute ninasse.

Kell viiruslikud oftalmoloogilised haigused ravim on ette nähtud silmatilkade kujul.

Niipea kui haiguse sümptomite raskusaste väheneb, tuleks instillatsioonide mahtu vähendada ühe tilgani. Ravikuur on 7 kuni 10 päeva.

Haigusest põhjustatud kahjustuste raviks herpesviirused , kantakse kahjustatud nahapiirkondadele ja limaskestadele õhuke kiht salvi kaks korda päevas, vastu pidades 12-tunnise intervalliga. Ravikuur on 3 kuni 5 päeva (kuni kahjustatud naha ja limaskestade terviklikkus on täielikult taastatud).

Profülaktikaks ARI ja on vaja määrida salviga ninakäigud . Protseduuride paljusus 1. ja 3. kursuse nädalal - 2 korda päevas. 2. nädala jooksul on soovitatav teha paus. Profülaktilistel eesmärkidel tuleks kogu perioodi vältel kasutada interferooni. hingamisteede haiguste epideemiad .

Rehabilitatsioonikursuse kestus lastel, kellel on sageli hingamisteede korduvad viiruslikud ja bakteriaalsed infektsioonid , ENT organid , korduv nakkus põhjustatud herpes simplex viirus on kaks kuud.

Kuidas lahjendada ja kuidas kasutada interferooni ampullides?

Interferooni kasutamise juhised ampullides näitavad, et enne kasutamist tuleb ampull avada, valage sinna toatemperatuuril vett (destilleeritud või keedetud), kuni ampulli märgistus vastab 2 ml-le.

Sisu loksutatakse õrnalt, kuni see on täielikult lahustunud. Lahus süstitakse mõlemasse nina läbipääs kaks korda päevas, viis tilka, süstide vahelise intervalliga vähemalt kuus tundi.

Ravi eesmärgil hakatakse IFN-i võtma esimesest gripi sümptomid . Ravimi efektiivsus on seda suurem, mida varem patsient seda võtma hakkab.

Kõige tõhusam on sissehingamise meetod (nina või suu kaudu). Üheks sissehingamiseks on soovitatav võtta ravimi kolm ampulli, mis on lahustatud 10 ml vees.

Vesi eelsoojendatakse temperatuurini, mis ei ületa +37 ° C. Inhalatsiooniprotseduurid viiakse läbi kaks korda päevas, hoides nende vahelist intervalli vähemalt üks kuni kaks tundi.

Pihustamisel või sisestusel lahustatakse ampulli sisu kahes milliliitris vees ja 0,25 ml (või viis tilka) süstitakse igasse ninakäiku kolm kuni kuus korda päevas. Ravi kestus on 2-3 päeva.

Lastele ennetavatel eesmärkidel mõeldud nina tilgad tilgutatakse (5 tilka) kaks korda päevas, haiguse arengu algfaasis suureneb instillatsioonide sagedus: ravimit tuleb manustada vähemalt viis kuni kuus korda päevas iga tund või kaks.

Paljud on huvitatud sellest, kas on võimalik tilgutada silma interferoonilahust. Vastus sellele küsimusele on jah.

Üleannustamine

Interferooni üleannustamise juhtumeid ei kirjeldata.

Koostoime

β-IFN ühildub ühendiga kortikosteroidravimid ja ACTH. Ravi ajal ei tohi seda võtta müelosupressiivsed ravimid kaasa arvatud tsütostaatikumid (see võib provotseerida aditiivne toime ).

Β-IFN on ette nähtud ettevaatusega koos ravimitega, mille kliirens sõltub suuresti tsütokroom P450 süsteemid (epilepsiavastased ravimid mõned antidepressandid ja jne).

Ärge võtke α-IFN ja Telbivudiin . Α-IFN samaaegne kasutamine kutsub esile suhte vastastikuse tugevnemise. Kui kombineerida fosfaasiid võib vastastikku tõusta müelotoksilisus mõlemad ravimid (soovitatav on hoolikalt jälgida muutusi koguses granulotsüüdid ja;

kell sepsis ;

laste raviks viirusnakkused (nt või);

raviks krooniline viirushepatiit .

IFN-i kasutatakse ka teraapias, mille eesmärk on sageli haigete patsientide rehabiliteerimine. hingamisteede infektsioonid lapsed.

Parim võimalus laste võtmiseks on tilk ninas: selle kasutusega interferoon ei tungi seedeelundkonda (enne nina jaoks mõeldud ravimi lahjendamist tuleb vett kuumutada temperatuurini 37 ° C).

Imikutele on interferoon ette nähtud ravimküünalde kujul (150 tuhat RÜ). Lastele mõeldud ravimküünlaid tuleb manustada üks 2 korda päevas, pidades silmas 12-tunnist intervalli süstide vahel. Ravikuur on 5 päeva. Lapse täielikuks ravimiseks ARVI Reeglina piisab ühest kursusest.

Ravi jaoks tuleb võtta kaks korda päevas 0,5 g salvi. Ravi kestab keskmiselt 2 nädalat. Järgmise 2-4 nädala jooksul kasutatakse salvi 3 korda nädalas.

Arvukad positiivsed ülevaated selle ravimi kohta näitavad, et ka selles ravimvormis oli ta ennast tõhusaks ravimeetodiks stomatiit ja põletikulised mandlid . Mitte vähem tõhusad on lastele mõeldud interferooni inhalatsioonid.

Ravimi kasutamise mõju suureneb märkimisväärselt, kui selle manustamiseks kasutatakse nebulisaatorit (on vaja kasutada seadet, mis pihustab osakesi läbimõõduga üle 5 mikroni). Inhalatsioonidel nebulisaatori kaudu on oma eripära.

Esiteks tuleb interferoon nina kaudu sisse hingata. Teiseks, enne seadme kasutamist on vaja selles kuumutusfunktsioon välja lülitada (IFN on valk, temperatuuril üle 37 ° C see hävib).

Inhaleerimiseks nebulisaatoris lahjendatakse ühe ampulli sisu 2–3 ml destilleeritud või mineraalveega (nendel eesmärkidel võite kasutada ka soolalahust). Saadud maht on ühe protseduuri jaoks piisav. Protseduuride paljusus päeva jooksul - 2 kuni 4.

Oluline on meeles pidada, et laste pikaajaline ravi interferooniga ei ole soovitatav, kuna sõltuvus areneb sellest ja seetõttu loodetav toime ei teki.

Interferoon raseduse ajal

Erandiks võivad olla juhtumid, kus oodatav ravi eeldus rasedale emale ületab kõrvaltoimete ja loote arengule kahjulike mõjude riski.

Võimalik, et rekombinantse IFN-i komponente koos rinnapiimaga saab eraldada. Kuna loote piima kaudu kokkupuute võimalus ei ole välistatud, ei määrata IFN imetavatele naistele.

Äärmisel juhul, kui IFN-i määramist ei saa vältida, soovitatakse naisel ravi ajal rinnaga toitmisest keelduda. Ravimi kõrvaltoimete (gripisümptomitega sarnaste sümptomite ilmnemine) leevendamiseks on soovitatav samaaegne manustamine koos IFN-iga. .

Leiutis on seotud geenitehnoloogia, biotehnoloogia, meditsiini ja farmakoloogiaga. Uus rekombinantne pSX50 multikoopiaplasmiidne DNA, mis kodeerib inimese leukotsüütide alfa-2b-interferooni sünteesi, mille ekspressiooni kontrollivad laktoosi ja trüptofaani promootorid ja transkriptsiooni terminaator. E. coli BL21 rekombinantse plasmiidse DNA pSX50 rakkude transformeerimise tulemusel saadi tüvi E. coli SX50, mis annab rekombinantse inimese leukotsüütide alfa-2b interferooni tootlikkusega kuni 0,9-1,0 g alfa-2b-interferooni 1 l söötmega. Rekombinantse alfa-2b-interferooni valmistamise meetod põhineb loodud rekombinantse E. coli SX50 tüve kasutamisel ja selle sügava kultiveerimise võimaldamisel madala trüptofaani sisaldusega toitesöötmel koos toitainete substraatide pideva lisamisega biosünteesi ajal, mikroorganismi rakkude mehaaniline hävitamine kõrgel rõhul, agregeeritud valgu lahustumine guanidiinvesinikkloriidi kontsentreeritud lahus, millele järgneb interferooni renatureerimine füsioloogilistes puhverlahustes kaotroopsete ainete juuresolekul ja selle puhastamine, kasutades interferooni kolmeastmelist kromatograafilist puhastamist kelaativatel Sepharose Fast Flow vaikudel, mis on immobiliseeritud Cu + 2 ioonidega, ioonvahetuskromatograafia kiirevoolulisel tüüpi СМ Sephsrose ioonvahetusvaikudel. filtreerimiskromatograafia Superdex 75 tüüpi vaikudel. Meetod võimaldab elektroforeesi järgi saada redutseerivates ja mitteredutseerivates tingimustes interferooni, mille puhtusaste on üle 99% geelide värvimisel hõbedaga ja üle 98% RF HPLC järgi ning pürogeenivabad (LAL-test) koguses, mis on vähemalt 400–800 mg 1 liitri söötme kohta. 3 n. ja 3 s.p. f-ly, 6 haige.

Vene Föderatsiooni patendi 2242516 arvud

Leiutis käsitleb biotehnoloogilisel teel saadud geenitehnoloogilisi ravimeid, eriti inimese rekombinantse leukotsüütide interferooni alfa-2b (edaspidi interferoon) tööstuslikuks tootmiseks kasutatavaid meetodeid, samuti Escherichia coli (E. coli) ja plasmiidi DNA tootvaid rekombinantseid tüvesid. interferooni sünteesi kodeerimine.

Interferoonid on valgumolekulid molekulmassiga 15 000 kuni 21 000 daltonit, mida rakud produtseerivad ja sekreteerivad vastusena viirusnakkusele või muudele patogeenidele. Interferone on kolm peamist rühma: alfa, beeta ja gamma. Need rühmad iseenesest pole homogeensed ja võivad sisaldada mitut erinevat interferooni molekuliliiki. Niisiis on tuvastatud enam kui 14 alfa-interferooni geneetilist sorti, mis pakuvad huvi ja mida kasutatakse meditsiinis laialdaselt viirusevastaste, antiproliferatiivsete ja immunomoduleerivate ainetena.

Tuntud meetodid inimese leukotsüütide interferooni tootmiseks viiruste ja muude indutseerijate poolt indutseeritud inimese doonori vere leukotsüütidest (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).

Nende interferoonide valmistamise meetodite peamine puudus on lõppsaaduse saastumise tõenäosus inimese viirustega, näiteks B- ja C-hepatiidi viirusega, immuunpuudulikkuse viirusega jne.

Praegu tunnustatakse interferooni tootmiseks mikrobioloogilise sünteesi abil paljulubavamat meetodit, mis annab võimaluse saada suhteliselt odavast lähtematerjalist märksa kõrgemat saagist. Selles protsessis kasutatud lähenemisviisid võimaldavad luua strukturaalse geeni variante, mis on bakterite ekspressiooniks optimaalsed, samuti regulatoorseid elemente, mis kontrollivad selle ekspressiooni.

Esialgsete mikroorganismidena kasutatakse erinevaid Pichia pastoris, Pseudomonas putida ja Escherichia coli tüvede konstruktsioone.

Puuduseks P. pastorise kasutamine interferooni tootjana (JN Garcia, JA Aguiar jt. // Inimese IFN-2b kõrgetasemeline ekspressioon Pichia pastorises .// Biotecnologia Aplicada, 12 (3), 152-155, 1995) seda tüüpi pärmi kääritamine on äärmiselt keeruline, on vaja biosünteesi käigus rangelt säilitada indutseerija, eriti metanooli kontsentratsioon. Ps-tüvede kasutamise puuduseks. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) on kääritamisprotsessi keerukus madalal ekspressioonitasemel (10 mg interferooni 1 liitri söötme kohta). Produktiivsem on Escherichia coli tüvede kasutamine (Semin. Oncol., 1997, Iun; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).

Tuntakse suurt hulka plasmiide \u200b\u200bja nendel põhinevat interferooni ekspresseerivat E. coli tüve: E. coli ATCC 31633 ja 31644 tüved plasmiididega Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 või Z-pBR 322 (Pstl) / HclN SN 35 -AHL6 (SU 1764515), E. coli pINF-AP2 tüvi (SU 1312961), E. coli pINF-F-Pa tüvi (AU 1312962), E. Coli tüvi SG 20050 plasmiidiga p280 / 21FN (V.V. Kravchenko et al., Bioorganic chemistry, 1987, v.13, nr 9, lk.1186-1193), E. coli tüvi SG 20050 plasmiidiga pINF14 (SU 1703691), E. coli tüvi SG 20050 plasmiidiga pINF16 (RU 2054041) ja jne. Nende tüvede kasutamisel põhinevate tehnoloogiate puuduseks on nende ebastabiilsus ja ka interferooni ebapiisav ekspressioon.

Koos kasutatud tüvede omadustega sõltub protsessi efektiivsus suuresti interferooni eraldamiseks ja puhastamiseks kasutatavast tehnoloogiast.

Interferooni tootmise tuntud meetod, mis hõlmab Ps-rakkude kasvatamist. putida, biomassi hävitamine, polüetüleenimiiniga töötlemine, ammooniumsulfaadi fraktsioneerimine, hüdrofoobne kromatograafia C-80 fenüülsilokroomil, lüsaadi pH fraktsioneerimine, selle kontsentreerimine ja diafiltrimine, DE-52 tselluloosiioonide kromatograafia, pH elueerimine, C-iooniga kromatograafia eluendil -52, kontsentreerimine filtrikasseti läbimisel ja geelfiltratsioonil Sephadex G-100 (SU 1640996). Selle meetodi puuduseks lisaks keerukale mitmeastmelisele kääritamisele on lõpptoote kättesaamisel ka mitmeastmeline etapp.

Samuti on olemas meetod interferooni tootmiseks, mis hõlmab E. coli tüve SG 20050 / pIF16 kultiveerimist LB puljongis kolbides termostaadiga loksutis, biomassi tsentrifuugimist, pesemist puhverlahusega ja ultraheliga töötlemist rakkude hävitamiseks. Saadud lüsaat tsentrifuugitakse, pestakse puhverlahuses oleva 3M uurea lahusega, lahustatakse puhvris guanidiinkloriidi lahuses, töödeldakse ultraheliga, tsentrifuugitakse, oksüdatiivne sulfitolüüs, dialüüs 8 M karbamiidi vastu, renatureerimine ja lõplik kaheetapiline kromatograafia CM-52 tselluloosil ja sefaadil. RU 2054041). Selle meetodi puuduseks on suhteliselt madal produktiivsus eraldamise ja puhastamise põhietappides. See kehtib eriti toote ultraheli töötlemise, dialüüsi ja oksüdatiivse sulfitolüüsi kohta, mis põhjustab interferooni saagise ebastabiilsust, samuti selle meetodi kasutamise võimatust interferooni tööstuslikuks tootmiseks.

Lähima analoogina (prototüübina) võib nimetada inimese leukotsüütide interferooni tootmise meetodit, mis seisneb rekombinantse E. coli tüve kasvatamises, saadud biomassi külmutamises temperatuuril mitte üle -70 ° C, sulatamises, mikroorganismi rakkude hävitamises lüsosüümiga, DNA ja RNA eemaldamisel, viies sisse DNA-ase lüsaadile ja eraldatud lahustumatu interferooni puhastamiseks pesemisvahenditega puhverlahusega, interferooni sademe lahustamisega guanidiinvesinikkloriidi lahuses, renatureerimisega ja üheastmelise puhastamisega ioonvahetuskromatograafia abil. Kolmandat promootorit sisaldava rekombinantse plasmiidi pSS5 abil saadud E. coli SS5 tüve kasutatakse: P lac, P t7 ja P trp ning sisestatud nukleotiidiasendustega alfa-interferooni geeni.

Interferooni ekspressiooni seda plasmiidi sisaldava E. coli SS5 tüve poolt kontrollivad kolm promootorit: P lac, P t7 ja P trp. Interferooni ekspressioonitase on umbes 800 mg rakususpensiooni 1 liitri kohta (RU 2165455).

Selle meetodi puuduseks on rakkude, mikroorganismi DNA ja RNA ensümaatilise hävitamise kasutamise vähene kohanemisvõime ning interferooni üheastmeline kromatograafiline puhastamine. See põhjustab interferooni eraldamise protsessi ebastabiilsust, põhjustab selle kvaliteedi langust ja piirab võimalust kasutada ülaltoodud skeemi interferooni tööstuslikuks tootmiseks. Selle plasmiidi ja sellel põhineva tüve puudusteks on T7-faagi tugeva reguleerimata promootori kasutamine plasmiidis E. coli tüves BL21 (DE3), milles T7 RNA polümeraasi geen asub lac-operoni promootori all ja mis alati “voolab”. Seetõttu toimub rakus pidevalt interferooni sünteesi, mis viib plasmiidi dissotsieerumiseni ja tüvirakkude elujõulisuse vähenemiseni ning selle tulemusel väheneb interferooni saagis.

Leiutise eesmärk on tootja E. coli rekombinantse tööstusliku tüve konstrueerimine, kasutades uut rekombinantset plasmiidset DNA-d, millel on kõrge interferooni biosünteesi tase, ja efektiivse tööstusliku tehnoloogia väljatöötamine meditsiiniliseks kasutamiseks mõeldud interferooni tootmiseks, mis vastab kvaliteedilt alfa-2b-interferooni aine "Euroopa farmakopöale".

See probleem lahendati rekombinantse plasmiidse DNA pSX50 ja tüve Escherichia coli SX50 loomisega, mis deponeeriti FSUE Riikliku Geneetika Uurimisinstituudi üleriigilises tööstuslike tüvede kollektsioonis, number VKPM B-8550,

samuti meetod rekombinantse alfa-2b-interferooni tootmiseks, mis põhineb E. coli SX50 rekombinantse tüve kasutamisel ja tagab selle sügava kasvatamise madala trüptofaani sisaldusega toitesöötmel koos toitainete substraatide pideva lisamisega biosünteesi ajal, mikroorganismi rakkude mehaaniline hävitamine kõrgel rõhul, agregeerunud ainete lahustumine valk guanidiinvesinikkloriidi kontsentreeritud lahuses, millele järgneb interferooni renatureerimine füsioloogilistes puhverlahustes kaotroopsete ainete juuresolekul ja interferooni kolmeastmeline kromatograafiline puhastamine Cu +2 ioonidega immobiliseeritud kelaativatel Sepharose Fast Flow vaikudel, ioonivahetuskromatograafia kiire vahetusega ioonivahetusvaikudel CM CMararose vaigud Vaigukromatograafia Superdex 75

Leiutis pakub välja uue rekombinantse pSX50 multikoopiaplasmiidi DNA, mis kodeerib inimese leukotsüütide alfa-2b-interferooni sünteesi, mille ekspressiooni kontrollivad laktoosi ja trüptofaani promootorid ja transkriptsiooni terminaator. Plasmiidil pSX50 on 3218 aluspaari (bp) ja seda iseloomustavad järgmised fragmendid:

Järjestus 1 nukleotiidist 176 nukleotiidini (n.) Sisaldab 176 aluspaari pikkust DNA fragmenti, mis sisaldab trüptofaani promootorit (P trp);

Järjestus alates 177 N. aastani 194 n. hõlmab sünteetilist 18 aluspaari pikkust DNA fragmenti, mis sisaldab Shine Delgarno järjestust, mis vastutab translatsiooni alustamise eest;

Järjestus aastast 195 N. Igaüks 695 n "50-bp DNA fragment sisaldab interferooni geeni järjestust järgmiste nukleotiidide asendustega: positsioonis 37 asendage A C-ga, positsioonis 39 asendage G T-ga, positsioonis 40 asendage A C-ga, positsioonis 42 asendage G T-ga positsioonis 67, asendades A C-ga, positsioonis 69 asendades G T-ga, positsioonis 70 asendades A C-ga, positsioonis 72 asendades A T-ga, positsioonis 96 asendades A T-ga, positsioonis 96 asendades G G-ga, positsioonis 100 asendades A-ga C, positsioon 102 asendades A T-ga, positsioonis 114 asendades A C-ga, positsioonis 120 asendades C G-ga, positsioonis 126 asendades G G-ga, positsioonis 129 asendades G A-ga, positsioonis 330 asendades G A-ga, positsioonis 330 asendades C G-ga, positsioonis 339 G asendamine A-ga, positsioonis 342 G asendamine A-ga, asendis 487 A asendamine C-ga, positsioonis 489 A asendamine T-ga, positsioonis 495 G asendamine A-ga;

Järjestus 696 N-ga. 713 n kumbagi hõlmab sünteetilist 18 aluspaari pikkust DNA fragmenti, mis sisaldab sünteetilist polülinkerit;

Järjestus alates 714 N. 1138 N "DNA" sisaldab plasmiidi pKK223-3 DNA fragmenti 4129 N-ga. 4553 n kumbagi Suurusega 425 aluspaari, mis sisaldab range transkriptsiooni terminaatori rrnBT1 T2 järjestust;

Järjestus aastast 1139 N. 1229 N "DNA" sisaldab plasmiidi pUC19 DNA fragmenti 2487 N-ga. Igaüks 2577 n 91 aluspaari, mis sisaldab β-laktaasi geeni promootorit (ampitsilliini resistentsuse geen - Amp R);

Järjestus aastast 1230 N. 2045 n kumbagi "DNA" sisaldab plasmiidi pUC4K DNA fragmenti 720 N-ga. Igaüks 1535 n Suurusega 816 aluspaari, mis sisaldab kan geeni struktuuripiirkonda;

Järjestus aastast 2046 N. 3218 n kumbagi Termin "pUC19" hõlmab plasmiidi pUC19 DNA fragmenti vahemikus 1625 kuni 453 N. 1173 bp, mis sisaldab plasmiidi (ori) ja lac promootori (P lac) replikatsiooni eest vastutavat järjestust.

Joonis 1-5 näitab plasmiidi pSX50 kujundusskeemi ja füüsikalist kaarti.

Joonis fig 6 näitab plasmiidi pSX50 jaoks loodud täielikku nukleotiidijärjestust.

Escherichia coli SX50 tüvi saadi Escherichia coli BL21 rakkude transformeerimisel plasmiidiga pSX50, kasutades traditsioonilist geenitehnoloogia tehnoloogiat. Tüve E.Coli SX50 iseloomustavad järgmised omadused.

Kultuurilised ja morfoloogilised iseärasused

Rakud on väikesed, sirged, paksenenud, vardakujulised, gram-negatiivsed, eostevabad. Rakud kasvavad hästi lihtsate toitainekeskkondade korral. Difco agaril kasvatades moodustuvad siledate servadega ümmargused, siledad, kumerad, hägused, läikivad hallid kolooniad. Vedelas söötmes (minimaalses söötmes koos glükoosiga või LB puljongis) kasvatades moodustavad nad intensiivse ühtlase udu.

Füüsikalis-bioloogilised omadused

Aerobe. Kasvu temperatuuride vahemik on 4–42 ° C optimaalse pH 6,5–7,5 juures.

Lämmastiku allikana kasutatakse nii mineraalsooli ammooniumi ja nitraatide vormis kui ka orgaanilisi ühendeid aminohapete, peptooni, trüptooni, pärmiekstrakti jt kujul.

Süsinikuallikana kasutatakse aminohappeid, glütseriini, süsivesikuid. Antibiootikumiresistentsus. Rakud on kanamütsiini suhtes resistentsed (kuni 100 μg / ml).

Tüvi Escherichia coli 8X50 - interferooni tootja.

Tüve säilitamise meetod, tingimused ja söötme koostis

L-araabis koos kanamütsiini lisamisega kontsentratsioonile 20 μg / ml õlis, L-puljongis, mis sisaldab 15% glütserooli ja vastavaid antibiootikume ampullides temperatuuril miinus 70 ° С, lüofiliseeritud olekus ampullides temperatuuril + 4 ° С.

Escherichia coli SX50 tüvi identifitseeriti Bergi identifikaatori (1974) abil liigi Escherichia coli tüvena.

Alfa-2b-interferooni tööstusliku tootmise meetod

Kavandatud meetodi eripära on tehnoloogia arendamine, mis võimaldab teil valida fermentatsiooni ajal koguneva lahustumatu vormi hulgast interferooni, mis võib märkimisväärselt lihtsustada eraldamisprotsessi tehnoloogilist skeemi ja suurendada sihttoote saagist.

Meetod seisneb Escherichia coli SX50 tüve kultiveerimises toitesöötmes, millele lisatakse biosünteesi ajal pidevalt toitainesubstraate, eelistatult glükoosi ja pärmiekstrakti, eelistatavalt madalama trüptofaani sisaldusega, mikroorganismide rakkude mehaaniline hävitamine kõrgsurvel 700–900 baari, interferooni lahustamine puhverlahuses. guanidiinvesinikkloriidi lahus, interferooni renatureerimine füsioloogilistes puhverlahustes kaotroopsete ainete juuresolekul, millele järgneb interferooni kolmeastmeline kromatograafiline puhastamine kelaativa Sepharose Fast Flow tüüpi vaikudel, mis on immobiliseeritud Cu + 2 ioonidega, ioonvahetuskromatograafia ioonivahetusvaikudel ja CM-kromatograafia kiirkromatograafia Superdex 75 vaigud.

Interferooni saamise üksikute etappide jaoks on optimaalsed tingimused järgmised:

Fermentatsioon viiakse läbi substraatide pideva lisamisega kogu protsessi vältel, mis viib interferooni kõrge ekspressioonitasemeni;

Rakkude hävitamine toimub Gaulini tüüpi desintegreerijaga rõhul 900 bar;

Lahustuvate rakuliste komponentide (DNA, RNA, valgud, lipopolüsahhariidid jne) eemaldamine toimub interferooni lahustumatu vormi pesemisega puhastusvahendeid sisaldavate puhverlahustega (Triton XI00, uurea jne);

Saadud sade, mis sisaldab interferooni, lahustatakse 6 M guanidiinvesinikkloriidi puhverlahuses;

Interferooni renatureerimine viiakse läbi füsioloogilises puhverlahuses, mis sisaldab kaotroopseid aineid;

Interferooni kolmeastmeline kromatograafiline puhastamine viiakse läbi Cu + 2 ioonidega immobiliseeritud kelaativas Sepharose Fast Flow, katioonivahetusvaigul CM Sepharose Fast Flow ja kromatograafiliselt geelfiltrimisel Superdex 75 vaigul;

Pärast iga kromatograafilist puhastamist filtreeritakse steriliseerimine läbi pürogeenivabade filtrite pooride suurusega 0,22 μm.

Interferooni saagis kirjeldatud meetodi rakendamisel on umbes 400-800 mg interferooni koos 1 l söötmega. Saadud toote kvaliteet vastab alfa-2b-interferooni käsitleva Euroopa farmakopöa standarditele ja nõuetele.

Kavandatud meetodi olulised erinevused prototüübist on järgmised:

Kasutades suurema produktiivsusega tüve kujundust, mis võimaldab biosünteesi ajal saada suurema koguse interferooni 1 liitri söötmega;

Rakulise biomassi tõhusa mehaanilise hävitamise kasutamine, mis võimaldab lühema ajaga saada vähem lahustunud interferooni puhtamat ekstrakti väiksema kadudega;

Füsioloogiliste puhverlahuste kasutamine renatureerimise ajal kaotroopsete ainete juuresolekul võimaldab suurendada õigesti renatureeritud interferooni saagist;

Interferooni kolmeastmeline kromatograafiline puhastamine võimaldab saada elektroforeesi järgi rohkem kui 99% -list interferooni ainet redutseerivates ja mitte redutseerivates tingimustes geelide värvimisel hõbedaga ja üle 98% RF-HPLC järgi ning praktiliselt ei sisalda pürogeene (LAL-test).

Vaadeldava leiutiste rühma olemust ja eeliseid illustreerivad järgmised näited.

Näide 1. Rekombinantsete plasmiidide RS50 konstrueerimine

Plasmiidi pSX50 konstrueerimise meetod sisaldab järgmisi etappe:

Vektori plasmiidi pSX10 konstrueerimine;

1. Plasmiidi pSX3 (2641 aluspaari) konstrueerimine

2. Vektorplasmiidi pSX10 konstrueerimine (2553 aluspaari)

Rekombinantse plasmiidi pSX41 (3218 aluspaari) konstrueerimine;

Rekombinantse plasmiidi pSX43 (3218 aluspaari) konstrueerimine;

Rekombinantse plasmiidi pSX45 (3218 aluspaari) konstrueerimine;

Rekombinantse plasmiidi pSX50 (3218 aluspaari) konstrueerimine.

Vektorplasmiidi pSX10 konstrueerimine

Vektorplasmiid pSX10 on vektor pUC19, milles beeta-laktaasi geeni kodeeriv järjestus, mis tagab resistentsuse ampitsilliini suhtes, asendatakse kan geeni kodeeriva järjestusega ja sisaldab plasmiidi pKK223-3 transkriptsiooni terminaatorit.

Vektorplasmiidi pSS10 konstrueerimine toimub kahes etapis:

Plasmiidi pSX3 (2641 aluspaari) saamine, mis on plasmiid pUC19, milles amp-geeni kodeeriv piirkond on asendatud kan-geeni kodeeriva piirkonnaga;

Veterinaarse plasmiidi pSX10 (2553 aluspaari) saamine, mis on plasmiid pSX3, milles BamHI saidi taha sisestatakse DNA fragment, mis kodeerib transkriptsiooni terminaatorit gT BT1 T2.

Plasmiidi pSX3 saamiseks viidi DNA amplifitseerimise viis ringi läbi PCR-ga (polümeraasi ahelreaktsioon). Esimese vooru jooksul, kasutades matriitsina plasmiidi pUC19 DNA-d, amplifitseeritakse 1828 aluspaari pikkune DNA fragment. (fragment PU1-PU2), kasutades praimereid:

See ja sellele järgnevad PCR reaktsioonid viiakse läbi järgmistes tingimustes: 20 mM Tis-HCl, pH 8,8, 10 mM (NH4) 2S04, 10 mM KCl, 2 tM MgCl2, 0,1% Triton X100,0,1 mg / ml BSA, 0,2 mM iga dNTP kohta, 1,25 ühikut Pfu DNA polümeraas, 100 ng DNA. Amplifikatsiooniprotsess koosneb järgmistest etappidest: kuumutamine temperatuuril 95 ° C 5 minutit, 35 PCR tsüklit (30 sekundit 95 ° C, 30 sekundit 56 ° C, 2 minutit 72 ° C) ja inkubeerimine 10 minutit temperatuuril 72 ° C. Pärast amplifitseerimist (ja pärast järgnevaid amplifikatsioone) puhastatakse DNA fragment elektroforeetiliselt 1% agaroosgeelil. Teise ja kolmanda vooru ajal amplifitseeritakse 555 aluspaari pikkune DNA fragment, kasutades matriitsina pUC4K plasmiidi DNA-d. (fragment KM1-KM2), kasutades praimereid:

ja 258 aluspaari pikkuse DNA fragmendi amplifitseerimine (KMZ-KM4) praimeritega

PCR-i viiendas voorus ühendatakse fragmendid (PU1-PU2) ja (KM1-KM4) järgmistel tingimustel: kuumutamine temperatuuril 95 ° C 5 minutit, 5 PCR-tsüklit (30 s 95 ° C, 30 sek 56 ° C, 10 min 72 ° C). C) ja inkubeeritakse 10 minutit temperatuuril 72 ° C. Pärast viimast PCR-i saadud DNA muundatakse otse E. coli tüve DH5 rakkudeks ja kantakse LA söötmele, mis sisaldab 20 μg / ml kanamütsiini. Pärast 12-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C skriinitakse kloonid, eraldatakse plasmiidne DNA ja viiakse läbi restriktsioonianalüüs. Tulemuseks on plasmiid pSX3, suurus 2641 p.

Vektori plasmiidi pSX10 saamiseks kulutage kolm DNA amplifikatsiooni ringi PCR abil. Esimese vooru jooksul, kasutades maatriksina plasmiidi pSX3 DNA, amplifitseeritakse 2025 aluspaari pikkune DNA fragment. (fragment 10.1-10.2), kasutades praimereid:

Teise ringi ajal, kasutades maatriksina plasmiidi pKK223-3 DNA, amplifitseeritakse DNA fragment fragmendiga 528 aluspaari. (fragment KK1-KK2), kasutades praimereid:

PCR-i kolmandas voorus ühendatakse fragmendid (10,1-10,2) ja (KK1-KK2) järgmistel tingimustel: kuumutamine temperatuuril 95 ° C 5 minutit, 5 PCR-tsüklit (30 s 95 ° C, 30 s 56 ° C, 10 min 72 ° C). C) ja inkubeeritakse 10 minutit temperatuuril 72 ° C. Pärast viimast PCR-i saadud DNA muundatakse otse E. coli tüve DH5 rakkudeks ja kantakse LA söötmele, mis sisaldab 20 μg / ml kanamütsiini. Pärast 12-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C skriinitakse kloonid, eraldatakse plasmiidne DNA ja viiakse läbi restriktsioonianalüüs. Tulemuseks on plasmiid pSX10, suurusega 2553 aluspaari

Rekombinantse plasmiidi pSX41 konstrueerimine

Rekombinantne plasmiid pSX41 on vektorplasmiidi pSX3 (2529 bp) Hind III - BamHI DNA fragment, Hind III on EcoRI 168 bp DNA fragment, mis kodeerib E. coli trüptofaani operoni promootorit (P trp), EcoRI-XbaI. 20 aluspaari sünteetilist DNA fragmenti, mis kodeerib SD järjestust (Shine-Delgarno) ja 501 aluspaari pikkust XbaI-BamHI DNA fragmenti, mis kodeerib inimese interferoon alfa 2b geeni.

Vektorplasmiidi pSX3 (2529 bp) Hind III - BamHI DNA fragmendi saamiseks töödeldi plasmiidi pSX3 DNA-d restriktsiooniensüümidega HindIII ja BamHI, millele järgnes elektroforeetiline puhastamine 1% agaroosgeelis. Trüptofaani operoni promootorit (P trp) kodeeriv Hind III EcoRI 168 aluspaari DNA fragment saadi PCR abil, kasutades matriitsina kogu E. coli DNA-d ja praimereid TRP1 ja PRP2, millele järgnes amplifitseeritud fragmendi töötlemine Hindlll ja EcoRI restriktsiooniensüümidega:

SD järjestust (Shine-Delgarno) kodeeriva sünteetilise 20 aluspaari pikkuse EcoRI-Xbali DNA fragmendi saamiseks sünteesitakse järgmised komplementaarsed oligonukleotiidid:

Inimese alfa-2b-interferooni geeni kodeeriv XbaI-BamIII 501 bp DNA fragment saadakse PCR abil, kasutades matriitsina inimese kogu DNA-d ja praimereid IFN1 ja IFN2, millele järgneb amplifitseeritud fragmendi töötlemine Xbal ja BamIII restriktsiooniensüümidega:

Lisaks ühendatakse elektroforeetiliselt puhastatud fragmendid, ligeeritakse T4-faagi ligaasi ensüümiga, DNA muundatakse E. coli tüve DH5 rakkudeks ja kantakse LA söötmele, mis sisaldab 20 μg / ml kanamütsiini. Pärast 12-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C skriinitakse kloonid, eraldatakse plasmiidne DNA, viiakse läbi restriktsioonianalüüs ja määratakse DNA primaarne struktuur. Tulemuseks on plasmiidi pSX41 suurus 3218 p. Järgmisena viiakse läbi interferooni geeni etapiviisiline mutagenees, et suurendada sihtprodukti ekspressiooni taset. Interferooni geeni mutagenees seisneb E. colis harva leiduvate kolmikute asendamises, vastavate aminohapete kodeerimisel samade aminohapete poolt kodeerivate kolmikutega, mida sageli leidub E. colis. Interferooni geeni DNA mutagenees viiakse läbi PCR abil.

Rekombinantse plasmiidi pSX43 konstrueerimine

Rekombinantse plasmiidi pSX43 saamiseks viiakse läbi üks DNA amplifitseerimise voor, kasutades matriitsina plasmiidi pSX41 DNA-d ja praimereid IFN3 ja IFN4:

PCR viiakse läbi järgmistel tingimustel: kuumutamine 5 minutit temperatuuril 95 ° C, 20 PCR tsüklit (30 s 95 ° C, 30 s 56 ° C, 10 min 72 ° C) ja inkubeerimine 20 minutit 72 ° C juures. Pärast PCR-i saadud DNA muundatakse otse E. coli tüve DH5 rakkudeks ja kantakse LA söötmele, mis sisaldab 20 μg / ml kanamütsiini. Pärast 12-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C skriinitakse kloonid, eraldatakse plasmiidne DNA, viiakse läbi restriktsioonianalüüs ja määratakse DNA primaarne struktuur. Tulemuseks on plasmiidi pSX43 suurus 3218 p.

Rekombinantse plasmiidi pSX45 konstrueerimine

Rekombinantse plasmiidi pSX45 saamiseks viiakse läbi üks DNA amplifitseerimise voor, kasutades matriitsina plasmiidi pSX43 DNA-d ja praimereid IFN5 ja IFN6:

PCR viiakse läbi järgmistes tingimustes: kuumutamine 5 minutit temperatuuril 95 ° C, 20 PCR tsüklit (30 s 95 ° C, 30 s 56 ° C, 10 min 72 ° C) ja inkubeerimine 20 minutit 72 ° C juures. Pärast PCR-i saadud DNA muundatakse otse E. coli tüve DH5 rakkudeks ja kantakse LA söötmele, mis sisaldab 20 μg / ml kanamütsiini. Pärast 12-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C skriinitakse kloonid, eraldatakse plasmiidne DNA, viiakse läbi restriktsioonianalüüs ja määratakse DNA primaarne struktuur. Tulemuseks on plasmiidi pSX45 suurus 3218 p.

Rekombinantse plasmiidi pSX50 konstrueerimine.

Rekombinantse plasmiidi pSX50 saamiseks viiakse läbi üks DNA amplifitseerimise voor, kasutades matriitsina plasmiidi DNA pSX45 ning praimereid IFN7 ja IFN8:

PCR viiakse läbi järgmistel tingimustel: kuumutamine 5 minutit temperatuuril 95 ° C, 20 PCR tsüklit (30 s 95 ° C, 30 s 56 ° C, 10 min 72 ° C) ja inkubeerimine 20 minutit 72 ° C juures. Pärast PCR-i saadud DNA muundatakse otse E. coli tüve DH5 rakkudeks ja kantakse LA söötmele, mis sisaldab 20 μg / ml kanamütsiini. Pärast 12-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C skriinitakse kloonid, eraldatakse plasmiidne DNA, viiakse läbi restriktsioonianalüüs ja määratakse DNA primaarne struktuur. Tulemuseks on plasmiidi pSX50 suurus 3218 p.

Näide 2. Tüve E. coli SX50 saamine - interferooni tootja

E. coli SX50 interferooni tootva tüve saamiseks muundatakse E. coli tüve BL21 rakud rekombinantse plasmiidiga pXX50. Interferooni tootvat tüve kasvatatakse 30 1 fermenteris optilise tiheduseni 25,0-30,0 p.u. M9 söötmes, mis sisaldab 1% kaseiinhappe hüdrolüsaati (Difco), 1% glükoosi, 40 μg / ml kanamütsiini, temperatuuril 38-39 ° C. Käärimisprotsessis viiakse toitainesubstraadi pidev lisamine läbi gravitomeetrilise kontrolleri.

Näide 3. Interferooni eraldamise meetod E. coli SX50 tüvest

Interferooni saamine viidi läbi neljas etapis:

1. etapp. E. coli SX50 tüve kasvatamine.

2 etapp. Interferooni lahustumatu vormi eraldamine ja puhastamine.

3 etapp. Interferooni lahustamine ja renatureerimine.

4. etapp. Interferooni kromatograafiline puhastamine.

1. etapp. E. coli SX50 tüve kasvatamine

E. coli SX50 tüve kasvatatud inokulaat 3 1 rikas LB söötmes 12 tunni jooksul temperatuuril 26 ° C viiakse aseptiliselt fermenterisse, mis sisaldab 27 L steriilset söödet, mis sisaldab M9, 1% happe kaseiini hüdrolüsaati, 1% glükoosi, 1 mM MgCl. 2, 0,1 mM CaCl2, 40 mg / ml kanamütsiini. Kultiveerimine fermenteris toimub temperatuuril 38-39 ° C, hoides pH 7 ± 0,15, subtiitrides automaatselt 40% naatriumhüdroksiidi lahusega. Lahustunud hapniku kontsentratsiooni vahemikus (50 ± 10)% küllastumisest hoitakse segisti kiiruse muutmisel 100–800 p / min ja õhu juurdevoolu 1–15 l / min. Substraatide, eriti glükoosi ja pärmiekstrakti kontsentratsiooni mõõdetakse kääritamise ajal ja nende kontsentratsiooni säilitatakse, muutes kontsentreeritud lahuste söötmiskiirust peristaltiliste pumpade kaudu gravimeetrilise kontrolleri abil.

Interferooni akumuleerumist lahustumatu vormis saadakse faasikontrastmikroskoopia, 15% polüakrüülamiidi geelis elektroforeesi (SDS-PAAG) ja pöördfaasilise kõrgfaasilise kromatograafia (RF HPLC) abil. Käärimine peatatakse pärast maksimaalse optilise tiheduse saavutamist (~ 25-30 p.u.) ja interferooni sünteesi peatamist. Pärast kääritamist eraldatakse kultiveerimisvedelik tsentrifuugimisega voolavas rootoris pöörlemiskiirusel 5000-10000 p / min. Biomass pakitakse kilekottidesse ja külmutatakse temperatuuril miinus 70 ° C.

2 etapp. Interferooni lahustumatu vormi eraldamine ja puhastamine

300-400 g E. coli SX50 tüve külmutatud biomassi suspendeeritakse 3000 ml puhvris 1 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 10 mM EDTA, 0,1% Triton X100). Suspensioon juhitakse läbi Gaulini tüüpi läbivoolu homogenisaatori, rõhku 900 baari hoitakse ja tsentrifuugitakse läbivoolu rootoris kiirusega 15 000 p / min. Saadud sadet pesti sarnastes tingimustes järjestikku puhvritega 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA, 3 M uurea) ja puhvriga 3 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA) ja lõpuks suspendeeriti interferooni sade 200 ml lahuses. ml puhverlahust 3. Sel juhul ei ole interferooni lahustumatu vormi eraldamise ja puhastamise aeg üle 5 tunni.

3 etapp. Interferooni lahustamine ja renatureerimine

Eelmises etapis saadud lahustumatu interferooni suspensioonile kuni 6 M kontsentratsioonini lisatakse kuiva guanidiinvesinikkloriidi, kontsentratsioonini 50 mM lisatakse ditiotreitooli, Tris-HCl pH 8,0 kontsentratsioonini 50 mM, NaCl kontsentratsioonini 150 mM ja Triton X100 kontsentratsioonini 0,1%, inkubeeritakse toatemperatuuril 2 tundi. Lahustumatu materjal eraldatakse steriliseerimisega, filtreerides läbi membraanide pooride läbimõõduga 0,22 mikronit.

Interferooni uuendamine viiakse läbi, lahjendades saadud lahust aeglaselt 100-200 korda puhvriga 4 (20 mm Tris-HCl, pH 8,0, 100 mm NaCl, 0,1 mm EDTA). Pärast seda inkubeeritakse renaturatsioonisegu pidevalt segades 12-15 tundi temperatuuril 4-8 ° C. Seejärel lisatakse kontsentratsioonini 1 mM magneesiumsulfaati ja agregaat materjal eemaldatakse steriliseerimise teel filtrimisega läbi membraanfiltri, mille pooride läbimõõt on 0,22 mikronit.

4. etapp. Interferooni kromatograafiline puhastamine

Interferooni kromatograafiline puhastamine toimub kolmes etapis.

1. Esimeses etapis saadud renatureeritud interferoon puhastatakse afiinsuskromatograafia abil, kasutades vaigu tüüpi Chelates Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences), mis on immobiliseeritud Cu + 2 ioonidega. Selleks kantakse interferoonilahus Cu +2 kelaativa Sepharose Fast Flow kolonni ja interferoon elueeritakse 0,1 M sidrunhappepuhvriga, pH 2,2.

2. Kromatograafilise puhastamise teises etapis kantakse interferoonilahus CM Sepharose Fast Flow tüüpi katioonivahetusvaigule (Amersham Biosciences) ja interferoon elueeritakse lahuste gradiendiga (0,0-0,5 M NaCl) puhvris 50 mM Na (CH3COO), pH 5,5.

3. Interferooni monomeerse vormi puhastamine interferooni polümeervormide jäänustest viiakse läbi interferooni puhastamise kolmandas etapis geelfiltratsiooniga Superdex 75 tüüpi vaigul (Amersham Biosciences). Kromatograafia viidi läbi 50 mM Na (CH3COO) puhvris, pH 5,0, mis sisaldas 0,15 M NaCl.

Kirjeldatud meetod interferooni eraldamiseks ja puhastamiseks võimaldab teil saada 10 l söötmest saadud biomassist ühe ekstraheerimise tsükli jooksul 7-10 päeva jooksul 4-8 g kõrgelt puhastatud interferooni. Saadud interferooni kvaliteet vastab täielikult alfa-2b-interferooni käsitleva Euroopa farmakopöa nõuetele, nimelt:

Interferooni kontsentratsioon on vähemalt 2 × 108 RÜ / ml;

Interferooni spetsiifiline aktiivsus on vähemalt 2,0 × 108 RÜ / mg;

Ravimi elektroforeetiline puhtus on geelide hõbedaga värvimisel redutseerivates ja mitteredutseerivates tingimustes vähemalt 99%;

Eraldatud interferooni isoelektriline punkt on umbes pH 5,8-6,3;

Isoleeritud interferooni peptiidikaart ei erine põhimõtteliselt Euroopa standardse CRS-interferooni peptiidikaardist;

Nagu ülaltoodud näidetest järeldub, võimaldab leiutiskirjeldatud rühm saada suhteliselt lihtsa ja usaldusväärse tehnoloogia abil suure saagisega interferooni alfa-2b.

NÕUDLUS

1. Rekombinantne plasmiidne DNA pSX50, mis kodeerib inimese rekombinantse alfa-2b-interferooni sünteesi, mida iseloomustab see, et selle suurus on 3218 aluspaari (bp) ja see koosneb järgmistest fragmentidest: järjestus 1 kuni 176 nukleotiidi (n.) Sisaldab fragmenti 176 aluspaari pikkune DNA, mis sisaldab trüptofaani promootorit (P trp), järjestused 177 kuni 194 n. "Translatsioon" hõlmab 18 aluspaari pikkust sünteetilist DNA fragmenti, mis sisaldab Shine Delgarno järjestust, mis vastutab translatsiooni initsiatsiooni eest, järjestus 195 kuni 695 N. "50-bp DNA fragment, mis sisaldab interferoon alfa-2b geeni nukleotiidiasendustega: 37 (A\u003e C), 39 (G\u003e T), 40 (A\u003e C), 42 (G\u003e T), 67 ( A\u003e C), 69 (G\u003e T), 70 (A\u003e C), 72 (A\u003e T), 96 (G\u003e A), 100 (A\u003e C), 102 (A\u003e T), 114 (A \u003e C), 120 (C\u003e G), 126 (G\u003e A), 129 (G\u003e A), 330 (C\u003e G), 339 (G\u003e A), 342 (G\u003e A), 487 (A\u003e C), 489 (A\u003e T), 495 (G\u003e A), järjestus 696 kuni 713 n. Termin "nukleotiid" hõlmab sünteetilist 18 aluspaari pikkust DNA fragmenti, mis sisaldab sünteetilist polülinkerit, järjestus 714 kuni 1138 N. "DNA" sisaldab plasmiidi pKK223-3 DNA fragmenti vahemikus 4129 kuni 4553 N. suurus 425 aluspaari, mis sisaldab range transkriptsiooni terminaatori rrnBT1 T2 järjestust, järjestus 1139 kuni 1229 N. "DNA" sisaldab plasmiidi pUC19 DNA fragmenti vahemikus 2487 kuni 2577 N. 91 aluspaari, mis sisaldab β-laktaasi geeni promootorit (ampitsilliiniresistentsuse geen - Amp R), järjestus 1230 kuni 2045 N. "DNA" sisaldab plasmiidi pUC4K DNA fragmenti 720 N-ga. Igaüks 1535 n suurus 816 bp, mis sisaldab kan geeni struktuuripiirkonda, järjestus alates 2046 N. 3218 n kumbagi Termin "pUC19" hõlmab plasmiidi pUC19 DNA fragmenti vahemikus 1625 kuni 453 N. 1173 bp, mis sisaldab plasmiidi (ori) ja lac promootori (P lac) replikatsiooni eest vastutavat järjestust.

2. Bakteritüvi Eschcerichia coli SX50, mida on transformeeritud vastavalt punktile 1 rekombinantse plasmiidiga, on inimese rekombinantse alfa-2b-interferooni leukotsüütide produtsent.

3. Meetod inimese alfa-2b-interferooni tootmiseks, mis hõlmab nõudluspunktile 2 vastava tüve Escherichia coli SX5 kultiveerimist toitesöötmes koos toitesubstraatide pideva lisamisega biosünteesi ajal, mikroorganismide rakkude mehaanilist hävitamist rõhul 700–900 baari, interferooni lahustamist guanidiinvesinikkloriidi puhverlahuses. , interferooni renatureerimine füsioloogilistes puhverlahustes kaotroopsete ainete juuresolekul, interferooni kolmeetapiline kromatograafiline puhastamine Cu +2 ioonidega immobiliseeritud kelaativatel Sepharose Fast Flow vaikudel, ioonvahetuskromatograafia CM Sepharose Fast Flow ioonvahetusvaikudel ja geelfiltratsioonikromatograafia 75 g vaigul .

4. Meetod vastavalt nõudluspunktile 3, mis erineb selle poolest, et kasvatamine toimub vähendatud trüptofaani sisaldusega toitesöötmel, millele on pidevalt lisatud toitesubstraate, eelistatult glükoosi ja pärmiekstrakti.

5. Meetod vastavalt nõudluspunktile 3, milles enne interferooni lahustamist puhastatakse lahustuvad rakulised komponendid, sealhulgas DNA, RNA, valgud, lipopolüsahhariidid, pestes puhverlahustega, mis sisaldavad Triton XI 00 tüüpi puhastusvahendeid, uurea.

6. Meetod vastavalt punktile 3, mis erineb selle poolest, et pärast iga kromatograafilist puhastamist steriliseeritakse filtreerimine läbi filtrite pooride suurusega 0,22 μm.

• Kliiniline farmakoloogia

  Farmakoloogiline toime - viirusevastane, kasvajavastane ja immunomoduleeriv toime.

  See on kõrgelt puhastatud rekombinantne valk molekulmassiga 19 300 daltonit. Saadakse E. coli kloonist, hübridiseerides bakteriplasmiidi interferooni sünteesi kodeeriva inimese leukotsüütide geeniga. Vastupidiselt interferoonile on alfa-2a arginiin positsioonil 23. Sellel on viirusevastane toime, mis on tingitud interaktsioonist spetsiifiliste membraaniretseptoritega ning RNA sünteesi ja lõpuks valkude indutseerimisega. Viimane omakorda takistab viiruse normaalset paljunemist või selle vabanemist. Sellel on immunomoduleeriv toime, mis on seotud fagotsütoosi aktiveerimise, antikehade ja lümfokiinide moodustumise stimuleerimisega. Sellel on kasvajarakkudele antiproliferatiivne toime.

  • Farmakokineetika

    / M sissejuhatusega siseneb 70% süsteemsesse vereringesse. Biotransformeerub peamiselt neerudes ja vähesel määral ka maksas. Interferoon alfa-2b eritub neerude kaudu.

• Näidustused
  • Krooniline B-hepatiit
  • Krooniline C-hepatiit
  • Seene mükoos.
  • Primaarne T-raku lümfosarkoom.
  • Karvane raku leukeemia.
  • Müeloom (üldistatud vormid).
  • Krooniline müeloidne leukeemia.
  • Pahaloomuline melanoom.
  • Kusepõie vähk (asub pealiskaudselt).
  • Basaalrakuline kartsinoom.
  • Suguelundite tüükad.
  • Kaposi sarkoom (sealhulgas AIDSiga).
  • Mitte-Hodgkini lümfoomid (kombineeritud ravi osana).

• Annustamine ja manustamine

  Individuaalne, sõltuvalt näidustustest ja raviskeemist.

  • Karvaste rakkude leukeemiaga

    Täiskasvanud / m või s / c süstitakse 2 miljonit RÜ / m 2 3 korda nädalas.

  • Kaposi sarkoomiga

    30 miljonit RÜ / m 3 3 korda nädalas.

• Vastunäidustused
  • Raske südame-veresoonkonna haigus.
  • Raske maksa- ja / või neerufunktsiooni kahjustus.
  • Kesknärvisüsteemi epilepsia ja / või tõsised funktsionaalsed häired.
  • Krooniline hepatiit koos tsirroosi ohuga.
  • Maksahaigus dekompensatsiooni faasis.
  • Krooniline hepatiit taustal või pärast eelnevat ravi immunosupressantidega (välja arvatud seisund pärast lühiajalise ravi katkestamist kortikosteroididega).
  • Autoimmuunne hepatiit.
  • Anamneesis autoimmuunhaigused.
  • Siirdamise retsipiendid on immunosupresseeritud.
  • Eelmine kilpnäärmehaigus.
  • Ülitundlikkus alfa-2b-interferooni suhtes.

• Rasedus ja imetamine

  Kasutamine raseduse ajal on võimalik juhul, kui oodatav kasu emale kaalub üles võimaliku ohu lootele. Alfa-2b-interferooni kasutamise ajal fertiilses eas naised peaksid kasutama usaldusväärseid rasestumisvastaseid meetodeid.

  Vajadusel peaks imetamise ajal otsustama kasutamine imetamise ajal.

• Koostoime

  Interferoonid võivad tugevdada varem välja kirjutatud või samal ajal välja kirjutatud ravimite neurotoksilist, müelotoksilist või kardiotoksilist toimet.

• Eritingimused

  Seda ei tohi kasutada patsiendid, kellel on anamneesis psüühikahäireid. Seda kasutatakse ettevaatusega patsientidel, kellel on anamneesis kopsuhaigusi (sealhulgas kroonilise obstruktiivse kopsuhaiguse korral), kellel on ketoatsidoosile kalduv suhkruhaigus, suurenenud vere hüübivus (sh anamneesis tromboflebiit ja kopsuemboolia); raske müelodepressiooni tingimused.

  Enne ravi alustamist ja süstemaatiliselt raviperioodil tuleb jälgida maksafunktsiooni, perifeerse vere pilti, vere biokeemilisi parameetreid, kreatiniini. Raviperioodil tuleb teostada keha piisav hüdratsioon. Kroonilise C-hepatiidiga patsientidel tuleb ravi ajal jälgida kilpnääret stimuleeriva hormooni taset.

  Kroonilise B-hepatiidi korral, millega kaasneb maksa sünteetilise funktsiooni langus (mis väljendub albumiini taseme languses või protrombiini aja pikenemises), tuleb hinnata ravi eeldatavat kasu ja võimalikku riski. Samaaegse psoriaasi kasutamine on õigustatud juhtudel, kui ravi eeldatav kasu ületab võimaliku riski. Samaaegse suhkruhaiguse või arteriaalse hüpertensiooniga on enne ravi alustamist ja ravi ajal vajalik uurida silmapõhja. Kroonilise südamepuudulikkuse, müokardiinfarkti ja / või varasemate või olemasolevate rütmihäirete esinemise korral tuleb ravi alfa-2b-interferooniga teostada range meditsiinilise järelevalve all.

  • Mõju sõidukite juhtimisvõimele ja juhtimismehhanismidele

    Mõju autojuhtimise võimele ja juhtimismehhanismidele Ravi alguses tuleks hoiduda potentsiaalselt ohtlikest tegevustest, mis nõuavad suuremat tähelepanu, kiireid psühhomotoorseid reaktsioone, kuni alfa-2b-interferooni toime stabiliseerumiseni.

  Alfa-2b-interferoon süstepulbri ja süstelahuse kujul on kantud oluliste ravimite loetellu.

KÕRTS: Alfa-2b-interferoon

Tootja: Sikor Biotech CJSC

Anatoomiline-terapeutilis-keemiline klassifikatsioon: Alfa-2b-interferoon

Registreerimisnumber Kasahstani Vabariigis: Nr RK-BP-5р012842

Registreerimise periood: 18.06.2014 - 18.06.2019

CNF (ravimid sisalduvad Kasahstani riiklikes ravimite retseptides)

ALO (lisatud tasuta ambulatoorsete ravimite loetellu)

ED (sisaldub ravimite loetelus ühtselt turustajalt ostetavate ravimite garanteeritud mahu piires)

Maksimaalne ostuhind Kasahstani Vabariigis: 33 116,64 KZT

Kasutusjuhend

Ärinimi

Realdiron

Rahvusvaheline mittekaubanduslik nimetus

Interferoon alfa

Annustamisvorm

Lüofiliseeritud süstelahuse pulber, 1 000 000 RÜ, 3 000 000 RÜ, 6 000 000 RÜ, 9 000 000 RÜ ja 18 000 000 RÜ

Koostis

Üks pudel sisaldab

toimeaine : interferoon alfa-2b rekombinatsioon

nantant 1 miljon RÜ, 3 miljonit RÜ, 6 miljonit RÜ, 18 miljonit RÜ

abiained: dekstraan 60, naatriumkloriid, dinaatriumvesinikfosfaat-dodehüdraat, naatriumdivesinikfosfaatdihüdraat

Kirjeldus

Valge pulber või poorne mass

Farmakoterapeutiline rühm

Immunomodulaatorid. Interferoonid. Interferoon alfa

ATX-kood L03AB05

Farmakoloogilised omadused

Farmakokineetika

Interferoon-alfa 2b maksimaalse kontsentratsiooni algusaeg pärast intramuskulaarset süstimist on 2 tundi ja kestab kuni 12 tundi, pärast subkutaanset manustamist - 7,3 tundi, 20 tunni pärast pole ravimit määratud.

T1 / 2 (poolestusaeg) intramuskulaarse süstimisega on umbes 2-3 tundi. Biosaadavus on 80%.

Ravim jaotub ühtlaselt elunditesse ja kudedesse. Biotransformeerunud neerudes ja vähesel määral ka maksas. Osaliselt eritub muutumatul kujul, peamiselt neerude kaudu.

Farmakodünaamika

Interferoon alfa-2b on kõrgelt puhastatud valk, mis saadakse rekombinantse DNA abil. Molekuli polüpeptiidne struktuur, bioloogiline aktiivsus ja farmakoloogilised omadused on identsed inimese alfa-2b-leukotsüütide interferooniga. Sellel on viirusevastane, antiproliferatiivne, kasvajavastane ja immunomoduleeriv toime.

Ravim, interakteerudes rakupinnal asuvate seotud retseptoritega, käivitab rakus keeruka muutuste ahela. Arvatakse, et need protsessid on seotud viiruse replikatsiooni ennetamisega rakus, raku proliferatsiooni pärssimise ja interferooni immunomoduleeriva toimega. Alfa-2b-interferoonil on võime stimuleerida makrofaagide fagotsüütilist aktiivsust, aga ka T-rakkude ja NK (looduslikud tapjad) tsütotoksilist aktiivsust. Need interferooni omadused ja tänu ravimi terapeutilisele toimele.

Näidustused

Kompositsioonravi osana täiskasvanutel. Viirushaigused

- krooniline aktiivne B-hepatiit, kui võimetus seda kasutada

pegüleeritud interferoonid

- krooniline C-hepatiit, võimetus seda kasutada

pegüleeritud interferoonid

Onkoloogilised haigused - karvrakuline leukeemia - krooniline müelogeenne leukeemia - neeruvähk - pahaloomuline melanoom.

Annustamine ja manustamine

Realdironi lahust manustatakse intramuskulaarselt või subkutaanselt. Enne kasutamist lahustatakse viaali sisu 1 ml süstevees. Ravimi lahus peaks olema läbipaistev, ilma lisanditeta. Kroonilise aktiivse B-hepatiidi korral manustatakse Realdironi 3 miljoni RÜ-ga kolm korda nädalas 6 kuu jooksul. Kui pärast 3-kuulist ravi ei toimu HBsAg kliinilist, biokeemilist paranemist ja / või kadumist, tühistatakse see ravim.

Kroonilise C-hepatiidi korral on Realdiron välja kirjutatud 3 miljoni RÜ-ga 3 korda nädalas 6 kuu jooksul. Kui pärast ravimi manustamist ravikuu jooksul ei vähene ALAT aktiivsus vereplasmas 50%, suurendatakse ravimi annust 6 miljoni RÜ-ni 3 korda nädalas. Kui pärast 3-kuulist ravi ei ole kliinilist, biokeemilist paranemist, tuleb ravim katkestada.

Karvrakulise leukeemia korral manustatakse iga kuu 2 miljonit kuud 3 miljonit RÜ; hematoloogilise remissiooni saavutamisel - 3 miljonit RÜ 3 korda nädalas.

Kroonilise müelogeense leukeemia korral manustatakse algannus 3 miljonit RÜ päevas intramuskulaarselt või subkutaanselt. Hea talutavuse korral suurendatakse ravimi annust igal nädalal maksimaalse annuseni 9 miljoni RÜ päevas. Pärast valgevereliblede arvu stabiliseerumist võib seda annust manustada kolm korda nädalas. Ravikuur viiakse läbi tähtajatult, välja arvatud juhtudel, kui ravi tuleb katkestada (näiteks haiguse kiire progresseerumisega või ravimi talumatusega).

Neeruvähi korral kasutatakse Realdironi 3 miljoni RÜ-s päevas 10 päeva jooksul. Hea talutavuse korral suurendatakse ravimi annust iga nädal maksimaalse annuseni 18 miljoni RÜ päevas. Pärast 3-kuulist ravi alustatakse säilitusravi, manustades 6 miljonit kuud kolm korda nädalas 18 miljonit RÜ.

Pahaloomulise melanoomi korral manustatakse algannus 3 miljonit RÜ päevas intramuskulaarselt või subkutaanselt. Hea talutavuse korral suurendatakse ravimi annust iga nädal maksimaalse annuseni 9-18 miljonit RÜ päevas. Pärast kliinilise efekti saavutamist lähevad nad üle hooldusravile 9-18 miljoni RÜ juures 3 korda nädalas. Adjuvantravi Realdironiga pärast I-II staadiumi pahaloomulise melanoomi kirurgilist eemaldamist võib pikendada retsidiivi aega.

Kõrvalmõjud

sageli

Palavik, väsimus, halb enesetunne, peavalu, lihasvalu, külmavärinad, värisemine, gripilaadsed sümptomid

Isutus, iiveldus

harvemini

Maitse muutus, stomatiit, suukuivus, hammaste pinna ja suu limaskesta kahjustus, oksendamine, kõhulahtisus, kõhukinnisus, lahtised väljaheited, kõhuvalu

Alopeetsia, sügelus, kuiv nahk, lööve

Seljavalu, lihasluukonna valu, rindkerevalu, müosiit, artralgia

Depressioon, enesetapumõtted ja -teod, enesetapp

Liigne higistamine, eriti öösel

Ärrituvus, unetus, unisus, ärevus, vähenenud tähelepanuulatus, emotsionaalne labiilsus, pearinglus

Arteriaalne hüpotensioon, hüpertensioon

harva

Põletik, punetus, ärritus süstekohal

Stimuleerimine, närvilisus, psühhoosid, sealhulgas hallutsinatsioonid, agressiivne käitumine, agitatsioon, teadvuse häired, neuropaatiad, polüneuropaatiad, perifeersed neuropaatiad, paresteesiad, hüpoteesia, krambid, teadvusekaotus

Viirusnakkus, sealhulgas herpes simplex

Erüteem

Konjunktiviit, silmavalu, nägemise hägustumine, võrkkesta hemorraagia, retinopaatia, võrkkesta fokaalsed muutused, võrkkesta arteri või veeni obstruktsioon, nägemisteravuse vähenemine või nägemisväljade piiramine, nägemisnärvi neuriit, nägemisnärvide turse

Nääre näärme talitlushäired

Ninaverejooks, ninakinnisus, sinusiit, nohu

Migreen

Köha, neelupõletik, kopsuinfiltraadid, kopsupõletik, hingeldus, hingamisteede häired

Kaalukaotus

Tahhükardia, südamepekslemine

Vähenenud libiido, menstruaaltsükli häired (amenorröa, menorraagia)

Suurenenud söögiisu, glossiit, veritsevad igemed

Rabdomüolüüs (mõnikord raske)

Kuulmispuue

Näoturse, neerufunktsiooni kahjustus, nefrootiline sündroom, neerud

puudulikkus, hüperurikeemia

Hüper- ja kilpnäärme alatalitus, hepatotoksilisus (sealhulgas surmaga lõppenud tagajärjed)

Leukopeenia

Hamba- ja periodontaalsed häired (sealhulgas need, mis põhjustavad hammaste kaotust)

harva

Suurenenud söögiisu, suhkurtõbi, hüperglükeemia, hüpertriglütserideemia, koliit, hepatomegaalia, pankreatiit

Tserebrovaskulaarne isheemia, ajuveresoonte hemorraagia

Sarkoidoos või sarkoidoosi ägenemine

Allergilised reaktsioonid, mitmevormiline erüteem, Stevens-Johnsoni sündroom, toksiline epidermaalne nekrolüüs

Trombotsütopeenia, lümfotsütopeenia, aplastiline aneemia

Lümfadenopaatia

Unisus

Nekroos süstekohal

Autoimmuunsed ja immuno-vahendatud häired, sealhulgas idiopaatiline trombotsütopeeniline purpur, reumatoidartriit, süsteemne erütematoosne luupus, vaskuliit ja Vogt-Kayanagi-Harada sündroom

Müra kõrvus

Müokardiinfarkt, arütmia (tavaliselt patsientidel, kellel on anamneesis kardiovaskulaarseid haigusi või kellel on eelnevalt olnud ravi kardiotoksiliste ravimitega), pöörduv mööduv kardiomüopaatia (täheldatud patsientidel, kellel pole anamneesis kardiovaskulaarseid haigusi)

Kopsupõletik

harva (monoteraapiana või kombinatsioonis ribaviriiniga)

Punase luuüdi täielik aplaasia

Laboratoorsete parameetrite muutused (sagedamini märgitakse koos kohtumisega

annused üle 10 miljoni RÜ päevas): granulotsüütide arvu vähenemine,

hemoglobiini taseme langus, ALAT, ASAT aktiivsuse suurenemine (arvestatud kõigi näidustuste korral, välja arvatud krooniline viirushepatiit), aluselise fosfataasi, LDH, seerumi uurea kreatiniini ja lämmastiku aktiivsus

Lastel, sealhulgas kombineeritud ravi ribaviriiniga (≥ 1% patsientide arvust, kes saavad ribaviriiniga kombineeritud ravi)

sageli

Aneemia, neutropeenia

Hüpotüreoidism

Depressioon, emotsionaalne labiilsus, unetus, ärrituvus, peavalu, pearinglus

Isutus, iiveldus, oksendamine, kõhuvalu, kõhulahtisus

Alopeetsia, lööve

Artralgia, müalgia

Põletikulised reaktsioonid süstekohal: valu, hüperemia

Nõrkus, palavik, külmavärinad, gripilaadsed sümptomid, halb enesetunne, viirusinfektsioon, farüngiit

Kehaline areng hilineb (aeglane kasv ja / või kehakaal võrreldes vanusega seotud näitajatega)

sageli

Pallor

Ninaverejooks

Bakteriaalne infektsioon, kopsupõletik, seeninfektsioon, herpes simplex

Klassifitseerimata neoplasmid

Trombotsütopeenia, lümfadenopaatia

Hüpertüreoidism, virilism

Hüpertriglütserideemia, hüperurikeemia

Agitatsioon, värinad, unisus, agressiivne reaktsioon, ärevus, apaatia, närvilisus, halvenenud käitumine, somnambulism, enesetapumõtted, segasus, ebanormaalsed unenäod, halvenenud uinumine, hüperkineesia, düsfoonia, paresteesia, hüperesteesia, hüpoteesia, vähenenud kontsentratsioon

Konjunktiviit, silmavalu, nägemiskahjustus, näärme näärmete talitlushäired

Raynaud 'tõbi

Köha, hingeldus, keskkõrvapõletik, ninakinnisus, nina limaskesta ärritus, rinorröa, aevastamine, tahhüpnoe

Seedetrakti häired, suurenenud söögiisu, kõhukinnisus, vormimata väljaheide, rektaalsed häired, düspepsia, gastroösofageaalne refluks, gastroenteriit, glossiit, stomatiit, sealhulgas peptiline haavand, hambavalu, maksafunktsiooni kahjustus

Valu rinnus, kõhu paremas ülemises kvadrandis

Akne, ekseem, muutused küüntel, kuiv nahk, praod nahal, valgustundlikkusreaktsioonid, makulopapulaarne lööve, naha pigmentatsiooni muutus, erüteem, higistamine, hematoom, sügelus

Kuseteede infektsioonid, kuseteede häired, enurees

Menstruaaltsükli häired, amenorröa, menorraagia, tupehäired, vaginiit, munandivalud (poistel)

Vastunäidustused

Ülitundlikkus toimeaine või ravimi ükskõik millise abiaine suhtes

Rasked kardioloogilised haigused, sealhulgas anamneesis (kontrollimatud südamehäired, hiljutine müokardiinfarkt, rasked südamerütmihäired)

Rasked neeru- või maksahaigused, sealhulgas neis esinevad tuumori metastaasid, neerupuudulikkus kreatiniini kliirensiga alla 50 ml / min, kui seda määrata koos ribaviriiniga

Dekompenseeritud tsirroos

Krooniline hepatiit koos raske tsirroosi või maksapuudulikkusega

Krooniline hepatiit, mida on varem ravitud immunosupressantide või glükokortikosteroididega

Autoimmuunhaigused, sealhulgas autoimmuunne hepatiit, praegu või ajaloos

Kilpnäärmehaigus ei ole tavapärase raviga kontrolli all

Laste ja noorukite vaimne või haiguslugu

Alla 3-aastased lapsed, kellel on krooniline C-hepatiit

Rasedus ja imetamine koos ribaviriiniga

Kui ravimit kirjutatakse välja koos ribaviriiniga, tuleb arvesse võtta ka ribaviriini kasutamisjuhendis toodud vastunäidustusi.

Ravimite koostoime

Alfa-interferoon pärsib maksa mikrosomaalseid ensüüme (tsütokroom P-450), seetõttu võib see häirida paljude ravimite (teofülliin jne) ainevahetust, suurendades nende kontsentratsiooni veres.

Seoses kesknärvisüsteemi kahjulike reaktsioonide tekke riskiga on vaja kasutada äärmise ettevaatusega narkootilisi, unerohtu ja rahusteid.

Ravimite koostoimet Realdirone'i ja teiste ravimite vahel ei ole täielikult uuritud. Realdironi kasutamisel koos ravimitega, millel võib olla müelosupressiivne toime, on soovitatav olla ettevaatlik.

Realdironi ja zidovudiini samaaegsel kasutamisel võib täheldada sünergistlikku mõju leukotsüütide arvu vähenemisele. Seda ravi saavatel patsientidel esines sagedamini annusest sõltuvaid neutropeenia juhtumeid kui zidovudiini monoteraapia korral eeldati. Patsientidel, kes saavad Realdirooni ribaviriini või zidovudiiniga kombineeritud ravi osana, on aneemia tekke risk suurem.

Realdironi kasutamise kombinatsioonis retroviirusevastaste ravimitega ei ole teada.

Interferoonid võivad mõjutada oksüdatiivseid metaboolseid protsesse. Seda tuleks arvestada, kui neid kasutatakse samaaegselt oksüdeerumise teel metaboliseeritavate ravimitega (sealhulgas ksantiini derivaatidega - aminofülliin ja teofülliin). Realdironi samaaegsel kasutamisel koos teofülliiniga on vaja kontrollida viimase kontsentratsiooni vereseerumis ja vajadusel kohandada annustamisskeemi.

Farmatseutiline koostoime

Realdirooni ei saa segada teiste raviainetega, välja arvatud 0,9% naatriumkloriidi lahus.

erijuhised

B-hepatiit

Enne B-hepatiidiga patsientide ravi alustamist on soovitatav läbi viia maksa biopsia, et kinnitada krooniline hepatiit ja teha kindlaks kahjustuse aste, samuti veenduda, et pole varem esinenud entsefalopaatiat, söögitoru veenilaiendite verejooksu, astsiiti ega muid dekompensatsiooni kliinilisi tunnuseid.

Enne ravi alustamist Realdironiga on vaja keskenduda järgmistele näitajatele:

bilirubiini määr

protrombiini ajaga täiskasvanud - pikendamine mitte rohkem kui 3 sekundit

lapsed - pikendamine mitte rohkem kui 2 sekundit

valged verelibled ≥ 4000 / mm3

täiskasvanud trombotsüüdid ≥ 100 000 / mm3

lapsed ≥ 150 000 / mm3

C-hepatiit

Parim ravivõimalus on kombinatsioonravi ribaviriiniga. Realdirooni monoteraapiat viiakse läbi peamiselt talumatuse korral või ribaviriini kasutamise vastunäidustuste esinemisel.

Realdironi kasutamisel koos kroonilise C-hepatiidi ribaviriiniga lugege läbi ka ribaviriini meditsiinilise kasutamise juhised.

Kõigil kroonilise C-hepatiidiga patsientidel soovitatakse teha maksa biopsia, kuid teatud juhtudel (nt viiruse genotüübiga 2 ja 3 patsiendid) on ravi võimalik ilma histoloogilise kinnituseta.

Täiskasvanud Enne ravi alustamist Realdirone'iga tuleb kontrollida, kas esinenud entsefalopaatiat, söögitoru veenilaiendite veritsust, astsiiti ega muid dekompensatsiooni kliinilisi tunnuseid, keskendudes järgmistele näitajatele:

bilirubiin ≤ 2 mg / dl

stabiilne ja normaalne albumiin

protrombiini aja pikenemine täiskasvanutel mitte rohkem kui 3 sekundit, lastel 2 sekundit

valged verelibled ≥ 3000 / mm3

trombotsüüdid ≥ 70 000 / mm3

seerumi kreatiniini tase on normaalne või lähedane normaalsele

Kui neerufunktsiooni kahjustusega (kreatiniini kliirens\u003e 50 ml / min) patsientidel kasutatakse realidironi kombinatsioonis ribaviriiniga, tuleb aneemia võimaluse korral kontrollida üldist vereanalüüsi, kreatiniini taset veres ja uriinis. Üle 50-aastaste patsientide puhul tuleks seda jälgida üks kord nädalas.

Monoteraapia.

Ravi ajal võib Realdirone kahjustada kilpnäärme talitlust - hüpotüreoidismi või hüpertüreoidismi. Enne Realdironi kasutamise alustamist peaksite määrama kilpnääret stimuleeriva hormooni (TSH) taseme vereseerumis ja viima läbi kilpnäärme ultraheli. Kui leitakse kõrvalekaldeid, tuleb läbi viia sobiv ravi.

Taotlus samaaegseks nakatumiseks HIV ja C-hepatiidi viirusega

Patsientidel, kes on lisaks nakatunud HIV-ga ja saavad väga aktiivset retroviirusevastast ravi (HAART), võib olla suurenenud piimhappe atsidoosi risk. Realdironi ja ribaviriini kasutamisel HAART-i suhtes tuleb olla ettevaatlik.

Tsirroosiga patsiendid, kes on lisaks nakatunud HIV ja C-hepatiidi viirusega ning saavad HAART-ravi, võivad suurendada maksa dekompensatsiooni ja surma riski.

Alfa-interferoonide täiendav kasutamine üksi või kombinatsioonis ribaviriiniga suurendab eespool nimetatud riski selles patsientide kategoorias.

Hamba- ja periodontaalsed häired

Laboriuuringud

Enne Realdiron-ravi alustamist ja perioodiliselt ravi ajal jälgitakse kõiki patsiente perifeerse verepildi osas (koos leukotsüütide valemi ja trombotsüütide arvu määramisega), vere biokeemiliste parameetritega (elektrolüütide, maksaensüümide, sealhulgas ALAT, bilirubiini, üldvalgu ja fraktsioonid, sealhulgas albumiin ja kreatiniin). Enne Realdirone-ravi ja ravi ajal peab vere parameetrite tase olema normi piires.

Kroonilise hepatiidiga patsientide ravi ajal on soovitatav selline laboratoorsete parameetrite jälgimise skeem: 1, 2, 4, 8, 12, 16 nädalat ja seejärel 1 kord kuus kogu ravikuuri jooksul. Kui ALAT tõuseb väärtuseni, mis on kaks korda suurem või suurem kui enne ravi algust, võib ravi Realdironiga jätkata, välja arvatud maksapuudulikkuse nähtude ilmnemisel. Sel juhul tuleb ALAT, protrombiini aja, aluselise fosfataasi, albumiini ja bilirubiini määrata iga 2 nädala järel.

Pahaloomulise melanoomiga patsientidel tuleb remissiooni esilekutsumise ajal jälgida iga nädal maksafunktsiooni ja valgeliblede arvu (koos valemiga) ja hooldusravi ajal iga kuu.

Kohene ülitundlikkus

Mööduva nahalööbe ilmnemine ei vaja ravi katkestamist.

Kaasnevad haigused

Realidiron määratakse ettevaatusega patsientidel, kellel on esinenud raskeid kroonilisi haigusi: krooniline obstruktiivne kopsuhaigus, ketoatsidoosile kalduv suhkruhaigus. Eriti ettevaatlik on ravimi kasutamisel veritsushäiretega patsientidel

(tromboflebiit, kopsuemboolia) või raske müelosupressiooniga.

Samaaegne keemiaravi

Realdironi kasutamine koos teiste kemoterapeutiliste ravimitega (näiteks tsütarabiin, tsüklofosfamiid, doksorubitsiin, teniposiid) suurendab toksiliste mõjude riski (nende raskusaste ja kestus), mis koos kasutamisel võivad ohustada elu või põhjustada surma. Suurenenud toksilisuse ohu tõttu on vaja hoolikalt valida Realdironi ja samaaegselt kasutatavate kemoterapeutiliste ainete annused.

Autoantikehad ja autoimmuunhaigused

Ravi Realdirone'iga võib põhjustada autoantikehade ilmnemist ja autoimmuunhaiguste arengut. Päriliku eelsoodumusega või autoimmuunhaiguste sümptomite kahtlusega patsiente tuleb nende varajase diagnoosimise eesmärgil pidevalt jälgida. Kui kroonilise C-hepatiidiga patsientidel kahtlustatakse Vogt-Koyanagi-Harada sündroomi, tuleb viirusevastane ravi katkestada ja arutada kortikosteroidravi vajadust.

Palavik

Palavik võib olla gripilaadse sündroomi ilming, mida sageli leitakse interferoonravi korral, kuid selle esinemise muud põhjused tuleks välistada.

Realdironiga ravi ajal tekkida võiva gripilaadse sündroomi korral on soovitatav kasutada kehatemperatuuri ja peavalu leevendamiseks palavikuvastast ravi.

Rakendus maksafunktsiooni kahjustuse korral

Harva on täheldatud toksilisest hepatiidist tingitud surmaga lõppevaid juhtumeid. Kui Realdirone'i kasutamise taustal ilmnevad maksafunktsiooni kahjustuse nähud, vajab patsient hoolikat jälgimist ja sümptomite progresseerumisel ravimi kasutamist katkestamist.

Kroonilise B-hepatiidiga patsientidel, kellel on vähenenud sünteetiline maksafunktsioon (näiteks vähenenud albumiin või pikenenud protrombiini aeg), kuid kes vastavad ravi alustamiseks valitud kriteeriumidele, võib olla suurem risk kliinilise dekompensatsiooni tekkeks, kui aminotransferaaside tase tõuseb ravi ajal. Enne selliste patsientide ravimist on vaja kindlaks teha Realidironi kasutamise eelised võimaliku riski üle.

Allografti tagasilükkamine

Esialgsete tõendite kohaselt võib ravi alfa-interferooniga suurendada neerutransplantaadi äratõukereaktsiooni riski. Samuti on teatatud siirdamise tagasilükkamisest maksas, kuigi põhjuslikku seost alfa-interferoonraviga ei ole kindlaks tehtud.

Hüdratsioon

Realdirone-raviga tuleb tagada keha piisav hüdratsioon, kuna mõnel juhul esines dehüdratsioonist põhjustatud arteriaalne hüpotensioon (mis võib vajada vedeliku täiendavat manustamist).

Kardiovaskulaarsüsteem

Patsiendid, kellel on esinenud kardiovaskulaarseid haigusi (krooniline südamepuudulikkus, müokardiinfarkt ja / või rütmihäired), vajavad Realdironi määramisel hoolikat meditsiinilist järelevalvet. On teatatud üksikutest kardiomüopaatia tekke juhtudest, mõnikord pärast ravi lõpetamist Realdironiga pöörduv. Soovitatav on anamneesis südamehaigus.

EKG enne Realdirone-ravi ja ravi ajal. Arütmiaid, peamiselt supraventrikulaarseid, esines harva ja peamiselt patsientidel, kellel on anamneesis kardiovaskulaarseid haigusi või kes on eelnevalt saanud ravi kardiotoksiliste ravimitega. Sellised rütmihäired on tavaliselt tavapärasest ravist alluvad, kuid need võivad nõuda annuse muutmist või Realdironi kasutamise katkestamist.

Hingamiselundkond

Kõigil patsientidel, kellel on palavik, köha, hingeldus või muud hingamissüsteemi sümptomid, tuleb teha rindkere röntgenograafia. Infiltraatide või kopsufunktsiooni häirete avastamise korral on vajalik patsiendi hoolikas jälgimine ja vajadusel Realdiron-ravi kaotamine. Selliseid muutusi esines sagedamini kroonilise C-hepatiidiga patsientidel, kes said ravi alfa-interferooniga, kuid on olnud teateid nende arengu juhtudest vähihaigetel, kes said ka alfa-interferoonravi. Alfa-interferoonravi ja kortikosteroidide kasutamise õigeaegne katkestamine viib kahjulike kopsureaktsioonide kadumiseni. Lisaks registreeriti Shosaikoto (Hiina taimne ravim) samaaegsel kasutamisel alfa-interferooniga nende sümptomite sagedamini.

Vaimsed häired ja kesknärvisüsteem (KNS). Mõnedel patsientidel täheldati Realdiron-ravi ajal ja isegi pärast ravi, peamiselt 6 kuud, tõsiseid kesknärvisüsteemi häireid, eriti depressiooni, suitsiidimõtteid ja enesetapukatseid. Laste ja noorukite seas, kes võtsid Realdironi koos ribaviriiniga, täheldati sagedamini enesetapumõtteid kui ka enesetapukatseid kui täiskasvanud patsientidel (2,4% versus 1%). Täiskasvanud patsientidel, lastel ja noorukitel täheldati ka muid psüühikahäireid, näiteks depressioon, emotsionaalne labiilsus, unisus. Selliste sümptomite ilmnemisel tuleb arvestada selliste kõrvaltoimete võimaliku tõsidusega. Kui sümptomid püsivad või suurenevad või kui tuvastatakse enesetapumõtted või agressiivne käitumine, on soovitatav ravi lõpetada ja osutada patsiendile sobivat psühhiaatrilist abi.

Patsiendid, kellel on vaimu- või haiguslugu. Interferooni alfa-2b kasutamine psüühika- või anamneesis esinevate häiretega lastel ja noorukitel on vastunäidustatud (vt lõik “Vastunäidustused”).

Kui otsustati, et ravi Realdirone'iga on vajalik juba olemasolevate psüühika- või anamneesihäiretega, samuti alkoholi- ja narkomaaniaga täiskasvanud patsientide jaoks, tuleks ravi alustada alles pärast sobivat individuaalset diagnoosi ja vaimse seisundi pidevat jälgimist.

Interferoonravi võib süvendada psüühikahäirete sümptomeid patsientidel, kes on nakatunud C-hepatiidi viirusesse, kellel on olemasolevaid psüühikahäireid või anamneesi, samuti alkoholi- ja narkomaaniaga. Kui selliste häiretega patsientide jaoks on vajalik ravi interferooniga, viiakse interferooniga eduka ravi saavutamiseks läbi vaimsete sümptomite asjakohane ravi. Lisaks on kohustuslik patsiendi käitumise individuaalse sõeluuringu nõue ja psüühikahäirete sümptomite sagedus. Enne psüühiliste sümptomite ilmnemist või ilmnemist on sellistele patsientidele soovitatav eelravi.

Oftalmilised häired

Kõik patsiendid peavad enne ravi alustamist läbima oftalmoloogilise uuringu. Realdiroonravi tuleb katkestada, kui uued silmahaigused tekivad või need süvenevad.

Kilpnäärme muutused

Kilpnäärme talitlushäirete korral võib ravi Realdironega alustada või jätkata, kui TSH sisaldust saab ravimiravi abil säilitada normaalsel tasemel. Realdirone kasutamise katkestamine ei normaliseeri ravi ajal kilpnäärme funktsiooni.

Ainevahetushäired

Seoses hüpertriglütserideemia tekke või progresseerumisega rasketeks vormideks on soovitatav kontrollida vere lipiidide taset.

Muud

Arvestades kirjeldatud psoriaasi ja sarkoidoosi ägenemise juhtumeid alfa-interferoonravi ajal, tuleks Realdironi kasutada sellistel patsientidel ainult siis, kui oodatav kasu ületab võimaliku riski.

Kasutamine lastel

Otsus laste kombineeritud ravi alustamiseks tuleks teha individuaalselt, võttes arvesse haiguse progresseerumise mõjusid (maksa põletikulise protsessi aktiivsus ja fibroos), samuti viroloogilise vastuse, HCV genotüübi ja viirusekoormuse kujunemise prognostilisi tegureid. Oluline on meeles pidada, et kombineeritud ravi võib mõne aasta jooksul ravitavatel lastel põhjustada uimastamist, kehakaalu tõusu, mille pöörduvus pole täiesti selge. Sellega seoses on soovitatav jälgida laste kehalist arengut ravi ajal ja 6 kuud pärast ravi lõppu.

Uimastamise riski vähendamiseks tuleb last ravida võimalikult kiiresti pärast kiiret kasvu puberteedieas. Puuduvad tõendid pikaajalise ravi mõju kohta puberteedile.

Reproduktiivmõju

Realdironi saavatel naistel on täheldatud seerumi östradiooli ja progesterooni taseme langust. Seetõttu saab Realdironi kasutada reproduktiivses eas naistel, kui nad kogu ravi vältel kasutavad tõhusaid rasestumisvastaseid vahendeid. Ettevaatlikult kasutatakse Realdironi ka reproduktiivses eas meestel.

Rasedus ja imetamine

Realdirone raseduse ajal kasutamise kohta pole piisavalt andmeid. Realidironi tuleks raseduse ajal kasutada juhul, kui potentsiaalne kasu emale on suurem kui potentsiaalne oht lootele.

Võimalike kahjulike mõjude tõttu imikule tuleks imetamise või ravimi katkestamise otsus teha, võttes arvesse selle ravivajaduse määra ema jaoks.

Ravimi toime tunnused sõiduki juhtimise võimele või potentsiaalselt ohtlikud mehhanismid.

Teraapia ajal on vaja patsienti hoiatada nõrkuse, unisuse, teadvusehäirete võimaliku arengu eest ja soovitada hoiduda autojuhtimisest või keerulistest seadmetest.

Üleannustamine

Praegu pole teatatud uimastite üledoseerimise juhtudest.

Üleannustamise korral on näidustatud sümptomaatiline ravi.